සෛල සංස්කෘතීන්. I. සෛල සංස්කෘතීන් ශරීරයෙන් පිටත සෛල වර්ධනය වීම
1966).
1940 ගණන්වල සහ 1950 ගණන්වල වෛරස් විද්‍යා ක්ෂේත්‍රයේ පර්යේෂණ සම්බන්ධව සෛල සංස්කෘතික ශිල්පීය ක්රම සැලකිය යුතු ලෙස වර්ධනය විය. සෛල සංස්කෘතීන් තුළ වර්ධනය වන වෛරස් එන්නත් නිෂ්පාදනය සඳහා පිරිසිදු වෛරස් ද්රව්ය ලබා ගැනීමට හැකි වී තිබේ. පෝලියෝ එන්නත සෛල සංස්කෘතික තාක්ෂණය භාවිතයෙන් නිපදවන ලද පළමු ඖෂධවලින් එකකි. 1954 දී, එන්ඩර්ස්, වෙලර් සහ රොබින්ස් නොබෙල් ත්‍යාගය ලබා ගත්තේ "පටක සංස්කෘතීන් තුළ පෝලියෝ වෛරසය වර්ධනය වීමේ හැකියාව සොයා ගැනීම සඳහා" ය. 1952 දී, සුප්රසිද්ධ මානව පිළිකා සෛල රේඛාව HeLa ලබා ගන්නා ලදී.
වගාවේ මූලික මූලධර්ම[ | ]
සෛල හුදකලා කිරීම[ | ]
ශරීරයෙන් පිටත වගා කිරීම සඳහා, සජීවී සෛල ක්රම කිහිපයකින් ලබා ගත හැකිය. සෛල රුධිරයෙන් හුදකලා කළ හැකි නමුත් සංස්කෘතිය තුළ වර්ධනය වීමට හැකියාව ඇත්තේ ලියුකෝසයිට් පමණි. බාහිර සෛලීය න්‍යාසය විනාශ කරන කොලජීනේස්, ට්‍රයිප්සින්, ප්‍රොනේස් වැනි එන්සයිම භාවිතයෙන් මොනො න්‍යෂ්ටික සෛල මෘදු පටක වලින් හුදකලා කළ හැකිය. මීට අමතරව, පටක කොටස් සහ ද්රව්ය පෝෂක මාධ්යයේ තැබිය හැකිය.
වස්තුවෙන් (ex vivo) සෘජුවම ලබාගත් සෛල සංස්කෘතීන් ප්රාථමික ලෙස හැඳින්වේ. බොහෝ ප්රාථමික සෛල, පිළිකා සෛල හැර, සීමිත ආයු කාලයක් ඇත. නිශ්චිත බෙදීම් ගණනකට පසුව, මෙම සෛල පැරණි වන අතර ඒවා තවමත් ශක්යව පැවතිය හැකි වුවද බෙදීම නතර කරයි.
සදාකාලිකව ප්රජනනය කළ හැකි අමරණීය ("අමරණීය") සෛල රේඛා ඇත. බොහෝ පිළිකා සෛල තුළ, මෙම හැකියාව අහඹු විකෘතියක ප්රතිඵලයකි, නමුත් සමහර රසායනාගාර සෛල රේඛා වලදී එය ටෙලමරේස් ජානය සක්රිය කිරීම මගින් කෘතිමව අත්පත් කර ගනී.
සෛල සංස්කෘතිය[ | ]
නියත උෂ්ණත්වයකදී විශේෂ පෝෂක මාධ්‍යවල සෛල වර්ධනය වේ. ශාක සෛල සංස්කෘතීන් පාලිත ආලෝකය භාවිතා කරන අතර ක්ෂීරපායී සෛල සාමාන්යයෙන් සෛල සංස්කෘතික ඉන්කියුබේටරයක පවත්වා ගෙන යන විශේෂ වායු පරිසරයක් ද අවශ්ය වේ. රීතියක් ලෙස, වාතයේ කාබන් ඩයොක්සයිඩ් සහ ජල වාෂ්ප සාන්ද්රණය නියාමනය කරනු ලැබේ, නමුත් සමහර විට ඔක්සිජන් ද වේ. විවිධ සෛල සංස්කෘතීන් සඳහා පෝෂක මාධ්ය සංයුතිය, ග්ලූකෝස් සාන්ද්රණය, වර්ධන සාධකවල සංයුතිය ආදියෙන් වෙනස් වේ. ක්ෂීරපායී සෛල සංස්කෘතික මාධ්‍යවල භාවිතා වන වර්ධන සාධක බොහෝ විට රුධිර සෙරුමය සමඟ එකතු වේ. මෙම නඩුවේ එක් අවදානම් සාධකයක් වන්නේ ප්‍රියොන් හෝ වෛරස් සමඟ සෛල සංස්කෘතිය ආසාදනය වීමේ හැකියාවයි. වගා කිරීමේදී, එක් වැදගත් ඉලක්කයක් වන්නේ දූෂිත ද්රව්ය භාවිතය ඉවත් කිරීම හෝ අවම කිරීමයි. කෙසේ වෙතත්, ප්රායෝගිකව මෙය සැමවිටම සාක්ෂාත් කර නොගනී. හොඳම, නමුත් වඩාත්ම මිල අධික ක්රමයක් වන්නේ තිරිඟු වෙනුවට පිරිසිදු වර්ධන සාධක එකතු කිරීමයි.
සෛල රේඛාවල හරස් දූෂණය[ | ]
සෛල සංස්කෘතීන් සමඟ වැඩ කරන විට, විද්‍යාඥයින්ට හරස් දූෂණය වීමේ ගැටළු ඇති විය හැක.
වර්ධනය වන සෛලවල ලක්ෂණ[ | ]
වර්ධනය වන සෛල, නිරන්තර බෙදීම හේතුවෙන්, සංස්කෘතිය තුළ ඒවායේ අතිරික්තයක් ඇති විය හැකි අතර, ප්රතිඵලයක් වශයෙන්, පහත සඳහන් ගැටළු මතු වේ:
සෛල සංස්කෘතීන්ගේ සාමාන්ය ක්රියාකාරිත්වය පවත්වා ගැනීම සහ සෘණාත්මක සංසිද්ධි වැළැක්වීම සඳහා, පෝෂක මාධ්යය වරින් වර ප්රතිස්ථාපනය කරනු ලැබේ, සෛල වාරිමාර්ග සහ මාරු කිරීම සිදු කරනු ලැබේ. බැක්ටීරියා, යීස්ට් හෝ වෙනත් සෛල රේඛා සමඟ සංස්කෘතීන් දූෂණය වීම වළක්වා ගැනීම සඳහා, සියලුම උපාමාරු සාමාන්යයෙන් විෂබීජහරණය කළ පෙට්ටියක සිදු කරනු ලැබේ. මයික්‍රොෆ්ලෝරා මර්දනය කිරීම සඳහා ප්රතිජීවක (පෙනිසිලින්, ස්ට්‍රෙප්ටොමිසින්) සහ දිලීර නාශක ඖෂධ (ඇම්ෆොටෙරිසින් බී) පෝෂක මාධ්‍යයට එකතු කළ හැක.
මිනිස් සෛල වගා කිරීම ජෛව ආචාර ධර්ම නීතිවලට තරමක් පටහැනියි, මන්ද හුදකලාව වැඩෙන සෛල මව් ජීවියාට වඩා ජීවත් විය හැකි අතර පසුව එය අත්හදා බැලීම් සඳහා හෝ නව ප්රතිකාර ක්රම දියුණු කර එයින් ලාභ ලැබීමට යොදා ගනී. මෙම ප්‍රදේශයේ පළමු තීන්දුව පැමිණියේ කැලිෆෝනියා ශ්‍රේෂ්ඨාධිකරණයෙන් ජෝන් මුවර් එදිරිව කැලිෆෝනියා විශ්ව විද්‍යාලයෙන් වන අතර, රෝගීන්ට ඔවුන්ගේ කැමැත්ත ඇතිව ඉවත් කරන ලද අවයවවලින් ලබාගත් සෛල රේඛාවල දේපල අයිතියක් නොමැති බව ප්‍රකාශ කළේය.
හයිබ්රිඩෝමා [ | ]
සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතය[ | ]
වෛරස් එන්නත් සහ විවිධ ජෛව තාක්ෂණ නිෂ්පාදන කාර්මික නිෂ්පාදනය සඳහා පදනම වන්නේ ස්කන්ධ සෛල සංස්කෘතියයි.
ජෛව තාක්ෂණ නිෂ්පාදන[ | ]
කාර්මික වශයෙන්, එන්සයිම, සින්තටික් හෝර්මෝන, මොනොක්ලෝනල් ප්‍රතිදේහ, ඉන්ටර්ලියුකින්, ලිම්ෆොකයින් සහ ප්‍රතිටියුමර් ඖෂධ වැනි නිෂ්පාදන සෛල සංස්කෘතීන්ගෙන් ලබා ගනී. බැක්ටීරියා සංස්කෘතීන් භාවිතයෙන් බොහෝ සරල ප්‍රෝටීන සාපේක්ෂ වශයෙන් පහසුවෙන් නිපදවිය හැකි වුවද, ග්ලයිකොප්‍රෝටීන වැනි වඩාත් සංකීර්ණ ප්‍රෝටීන දැනට නිපදවිය හැක්කේ සත්ව සෛල වලින් පමණි. මෙම වැදගත් ප්‍රෝටීන වලින් එකක් වන්නේ එරිත්‍රොපොයිටින් හෝමෝනයයි. වර්ධනය වන ක්ෂීරපායී සෛල සංස්කෘතීන් සඳහා වන පිරිවැය තරමක් ඉහළ ය, එබැවින් කෘමීන් හෝ ඉහළ ශාක සෛල සංස්කෘතීන් තුළ සංකීර්ණ ප්‍රෝටීන නිපදවීමේ හැකියාව පිළිබඳව දැනට පර්යේෂණ සිදු කෙරේ.
පටක සංස්කෘතිය[ | ]
සෛල සංස්කෘතිය පටක සංස්කෘතියේ සහ පටක ඉංජිනේරු තාක්‍ෂණයේ අත්‍යවශ්‍ය අංගයකි, මන්ද එය සෛල වර්ධනය කිරීමේ පදනම නිර්වචනය කරන අතර ඒවා ශක්ය තත්වයක පවත්වා ගෙන යයි.
එන්නත් [ | ]
පෝලියෝ, සරම්ප, කම්මුල්ගාය, රුබෙල්ලා සහ පැපොල සඳහා එන්නත් මේ වන විට සෛල සංස්කෘතික ක්රම භාවිතයෙන් නිෂ්පාදනය කෙරේ. H5N1 වෛරස් වික්‍රියාව නිසා ඇති වන ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා වසංගතයේ තර්ජනය හේතුවෙන්, එක්සත් ජනපද රජය දැනට සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතයෙන් කුරුළු ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා එන්නතක් ලබා ගැනීම සඳහා පර්යේෂණ සඳහා අරමුදල් සපයයි.
ක්ෂීරපායී නොවන සෛල සංස්කෘතීන්[ | ]
ශාක සෛල සංස්කෘතීන්[ | ]
ශාක සෛල සංස්කෘතීන් සාමාන්යයෙන් වගා කරනු ලබන්නේ ද්රව පෝෂක මාධ්‍යයක අත්හිටුවීමක් ලෙස හෝ ඝන පෝෂක පදනමක් මත කෝලස් සංස්කෘතියක් ලෙසය. විභේදනය නොකළ සෛල සහ කෝලස් වගා කිරීම සඳහා ශාක වර්ධක හෝමෝන, ඔක්සින් සහ සයිටොකිනින් වල යම් සමතුලිතතාවයක් පවත්වා ගැනීම අවශ්ය වේ.
බැක්ටීරියා, යීස්ට් සංස්කෘතීන්[ | ]
ප්‍රධාන ලිපිය:
බැක්ටීරියා සහ යීස්ට් සෛල කුඩා සංඛ්යාවක් වගා කිරීම සඳහා, සෛල ජෙලටින් හෝ agar-agar මත පදනම් වූ ඝන පෝෂක මාධ්යයක් මත ආලේප කර ඇත. මහා පරිමාණ නිෂ්පාදනය සඳහා, දියර පෝෂක මාධ්ය (හොදි) වල වගා කිරීම භාවිතා වේ.
වෛරස් සංස්කෘතීන්[ | ]
S. Ringer විසින් ශරීරයෙන් පිටත සතුන්ගේ හෘද ස්පන්දනය පවත්වා ගැනීම සඳහා සෝඩියම්, පොටෑසියම්, කැල්සියම් සහ මැග්නීසියම් ක්ලෝරයිඩ් අඩංගු සේලයින් ද්‍රාවණයක් නිපදවා ඇත. 1885 දී විල්හෙල්ම් රූක්ස් විසින් පටක රෝපණ මූලධර්මය ස්ථාපිත කළේ කුකුල් කලලයකින් ඇට මිදුළු කොටසක් නිස්සාරණය කර උණුසුම් සේලයින් ද්‍රාවණයක දින කිහිපයක් තබා ගැනීමෙනි. ජෝන්ස් හොප්කින්ස් වෛද්‍ය විද්‍යාලයේ සහ පසුව යේල් විශ්ව විද්‍යාලයේ සේවය කළ රොස් ග්‍රැන්විල් හැරිසන්, පටක රෝපණ ක්‍රමවේදයක් නිර්මාණය කරමින් 1907-1910 දී ඔහුගේ පර්යේෂණවල ප්‍රතිඵල ප්‍රකාශයට පත් කළේය. 1910 දී, Peyton Routh, චිකන් සාර්කෝමා සෛල සංස්කෘතිය සමඟ වැඩ කරමින්, නිරෝගී සතුන් තුළ පිළිකා සෑදීමට හේතු විය. මෙය පසුව ඔන්කොජනික් වෛරස් සොයා ගැනීමට හේතු විය (කායික විද්යාව හෝ වෛද්‍ය විද්යාව පිළිබඳ නොබෙල් ත්‍යාගය 1966).
1940 ගණන්වල සහ 1950 ගණන්වල වෛරස් විද්‍යා ක්ෂේත්‍රයේ පර්යේෂණ සම්බන්ධව සෛල සංස්කෘතික ශිල්පීය ක්රම සැලකිය යුතු ලෙස වර්ධනය විය. සෛල සංස්කෘතීන් තුළ වර්ධනය වන වෛරස් එන්නත් නිෂ්පාදනය සඳහා පිරිසිදු වෛරස් ද්රව්ය ලබා ගැනීමට හැකි වී තිබේ. පෝලියෝ එන්නත සෛල සංස්කෘතික තාක්ෂණය භාවිතයෙන් නිපදවන ලද පළමු ඖෂධවලින් එකකි. 1954 දී, එන්ඩර්ස්, වෙලර් සහ රොබින්ස් නොබෙල් ත්‍යාගය ලබා ගත්තේ "පටක සංස්කෘතීන් තුළ පෝලියෝ වෛරසය වර්ධනය වීමේ හැකියාව සොයා ගැනීම සඳහා" ය. 1952 දී, සුප්රසිද්ධ මානව පිළිකා සෛල රේඛාව HeLa ලබා ගන්නා ලදී.
වගාවේ මූලික මූලධර්ම
සෛල හුදකලා කිරීම
ශරීරයෙන් පිටත වගා කිරීම සඳහා, සජීවී සෛල ක්රම කිහිපයකින් ලබා ගත හැකිය. සෛල රුධිරයෙන් හුදකලා කළ හැකි නමුත් සංස්කෘතිය තුළ වර්ධනය වීමට හැකියාව ඇත්තේ ලියුකෝසයිට් පමණි. බාහිර සෛලීය න්‍යාසය විනාශ කරන කොලජීනේස්, ට්‍රයිප්සින්, ප්‍රොනේස් වැනි එන්සයිම භාවිතයෙන් මොනො න්‍යෂ්ටික සෛල මෘදු පටක වලින් හුදකලා කළ හැකිය. මීට අමතරව, පටක කොටස් පෝෂක මාධ්යයේ තැබිය හැකිය.
වස්තුවෙන් (ex vivo) සෘජුවම ලබාගත් සෛල සංස්කෘතීන් ප්රාථමික ලෙස හැඳින්වේ. බොහෝ ප්රාථමික සෛල, පිළිකා සෛල හැර, සීමිත ආයු කාලයක් ඇත. නිශ්චිත බෙදීම් ගණනකට පසු, මෙම සෛල පැරණි බවට පත් වන අතර, ඒවායේ ශක්යතාව අහිමි නොවිය හැකි වුවද, බෙදීම නතර වේ.
සදාකාලිකව ප්රජනනය කළ හැකි අමරණීය ("අමරණීය") සෛල රේඛා ඇත. බොහෝ පිළිකා සෛල තුළ, මෙම හැකියාව අහඹු විකෘතියක ප්රතිඵලයකි, නමුත් සමහර රසායනාගාර සෛල රේඛා වලදී එය ටෙලමරේස් ජානය සක්රිය කිරීම මගින් කෘතිමව අත්පත් කර ගනී.
සෛල සංස්කෘතිය
සෛල නියත උෂ්ණත්වයකදී විශේෂ පෝෂක මාධ්‍යවල වර්ධනය වන අතර ක්ෂීරපායී සෛලවලට සාමාන්යයෙන් සෛල සංස්කෘතික ඉන්කියුබේටරයක පවත්වා ගෙන යන විශේෂ වායු පරිසරයක් ද අවශ්ය වේ. රීතියක් ලෙස, වාතයේ කාබන් ඩයොක්සයිඩ් සහ ජල වාෂ්ප සාන්ද්රණය නියාමනය කරනු ලැබේ, නමුත් සමහර විට ඔක්සිජන් ද වේ. විවිධ සෛල සංස්කෘතීන් සඳහා පෝෂක මාධ්ය සංයුතිය, pH අගය, ග්ලූකෝස් සාන්ද්රණය, වර්ධන සාධකවල සංයුතිය ආදියෙහි වෙනස් වේ. සංස්කෘතික මාධ්‍යවල භාවිතා වන වර්ධන සාධක බොහෝ විට රුධිර සෙරුමය සමඟ එකතු වේ. මෙම නඩුවේ එක් අවදානම් සාධකයක් වන්නේ ප්‍රියොන් හෝ වෛරස් සමඟ සෛල සංස්කෘතිය ආසාදනය වීමේ හැකියාවයි. වගා කිරීමේදී, එක් වැදගත් ඉලක්කයක් වන්නේ දූෂිත ද්රව්ය භාවිතය ඉවත් කිරීම හෝ අවම කිරීමයි. කෙසේ වෙතත්, ප්රායෝගිකව මෙය සැමවිටම සාක්ෂාත් කර නොගනී. හොඳම, නමුත් වඩාත්ම මිල අධික ක්රමයක් වන්නේ තිරිඟු වෙනුවට පිරිසිදු වර්ධන සාධක එකතු කිරීමයි.
මිනිස් සෛල වගා කිරීම ජෛව ආචාර ධර්ම නීතිවලට තරමක් පටහැනියි, මන්ද හුදකලාව වැඩෙන සෛල මව් ජීවියාට වඩා ජීවත් විය හැකි අතර පසුව එය අත්හදා බැලීම් සඳහා හෝ නව ප්රතිකාර ක්රම දියුණු කර එයින් ලාභ ලැබීමට යොදා ගනී. මෙම ප්‍රදේශයේ පළමු තීන්දුව පැමිණියේ කැලිෆෝනියා ශ්‍රේෂ්ඨාධිකරණයෙන් ජෝන් මුවර් එදිරිව කැලිෆෝනියා විශ්ව විද්‍යාලයෙන් වන අතර, රෝගීන්ට ඔවුන්ගේ කැමැත්ත ඇතිව ඉවත් කරන ලද අවයවවලින් ලබාගත් සෛල රේඛාවල දේපල අයිතියක් නොමැති බව ප්‍රකාශ කළේය.
හයිබ්රිඩෝමා
සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතය
වෛරස් එන්නත් සහ විවිධ ජෛව තාක්ෂණ නිෂ්පාදන කාර්මික නිෂ්පාදනය සඳහා පදනම වන්නේ ස්කන්ධ සෛල සංස්කෘතියයි.
ජෛව තාක්ෂණ නිෂ්පාදන
කාර්මික වශයෙන්, එන්සයිම, සින්තටික් හෝර්මෝන, මොනොක්ලෝනල් ප්‍රතිදේහ, ඉන්ටර්ලියුකින්, ලිම්ෆොකයින් සහ ප්‍රතිටියුමර් ඖෂධ වැනි නිෂ්පාදන සෛල සංස්කෘතීන්ගෙන් ලබා ගනී. බැක්ටීරියා සංස්කෘතීන් තුළ rDNA භාවිතයෙන් බොහෝ සරල ප්‍රෝටීන සාපේක්ෂ වශයෙන් පහසුවෙන් නිපදවිය හැකි වුවද, glycoproteins වැනි වඩාත් සංකීර්ණ ප්‍රෝටීන දැනට නිපදවිය හැක්කේ සත්ව සෛල වලින් පමණි. මෙම වැදගත් ප්‍රෝටීන වලින් එකක් වන්නේ එරිත්‍රොපොයිටින් හෝමෝනයයි. වර්ධනය වන ක්ෂීරපායී සෛල සංස්කෘතීන් සඳහා වන පිරිවැය තරමක් ඉහළ ය, එබැවින් කෘමීන් හෝ ඉහළ ශාක සෛල සංස්කෘතීන් තුළ සංකීර්ණ ප්‍රෝටීන නිපදවීමේ හැකියාව පිළිබඳව දැනට පර්යේෂණ සිදු කෙරේ.
පටක සංස්කෘතිය
සෛල සංස්කෘතිය පටක සංස්කෘතියේ සහ පටක ඉංජිනේරු තාක්‍ෂණයේ අත්‍යවශ්‍ය අංගයකි, මන්ද එය සෛල වර්ධනය කිරීමේ පදනම නිර්වචනය කරන අතර ඒවා ශක්ය තත්වයක පවත්වා ගෙන යයි.
එන්නත්
පෝලියෝ, සරම්ප, කම්මුල්ගාය, රුබෙල්ලා සහ පැපොල සඳහා එන්නත් මේ වන විට සෛල සංස්කෘතික ක්රම භාවිතයෙන් නිෂ්පාදනය කෙරේ. H5N1 වෛරස් වික්‍රියාව නිසා ඇති වන ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා වසංගතයේ තර්ජනය හේතුවෙන්, එක්සත් ජනපද රජය දැනට සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතයෙන් කුරුළු ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා එන්නතක් ලබා ගැනීම සඳහා පර්යේෂණ සඳහා අරමුදල් සපයයි.
ක්ෂීරපායී නොවන සෛල සංස්කෘතීන්
ශාක සෛල සංස්කෘතීන්
ශාක සෛල සංස්කෘතීන් සාමාන්යයෙන් වගා කරනු ලබන්නේ ද්රව පෝෂක මාධ්‍යයක අත්හිටුවීමක් ලෙස හෝ ඝන පෝෂක පදනමක් මත කෝලස් සංස්කෘතියක් ලෙසය. විභේදනය නොකළ සෛල සහ කෝලස් වගා කිරීම සඳහා ශාක වර්ධක හෝමෝන, ඔක්සින් සහ සයිටොකිනින් වල යම් සමතුලිතතාවයක් පවත්වා ගැනීම අවශ්ය වේ.
බැක්ටීරියා, යීස්ට් සංස්කෘතීන්
ප්‍රධාන ලිපිය: බැක්ටීරියා සංස්කෘතිය
බැක්ටීරියා සහ යීස්ට් සෛල කුඩා සංඛ්යාවක් වගා කිරීම සඳහා, සෛල ජෙලටින් හෝ agar-agar මත පදනම් වූ ඝන පෝෂක මාධ්යයක් මත ආලේප කර ඇත. මහා පරිමාණ නිෂ්පාදනය සඳහා, දියර පෝෂක මාධ්ය (හොදි) වල වගා කිරීම භාවිතා වේ.
වෛරස් සංස්කෘතීන්
මාතෘකාව 10. වෛරස් විද්‍යාවේ සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතය. සෛල සංස්කෘතීන් වර්ග
ප්‍රශ්න පාලනය කරන්න
ඊළඟ පාඩම සඳහා පැවරුම.
පාඩම සාරාංශ කිරීම.
කාර්යයන්
1. ආසාදනය සඳහා චිකන් කළල සකස් කරන්න.
2. නිව්කාසල් රෝගය සහ පරෙවි (චිකන්) පොක්ස් වෛරස් සමඟ කුකුළු මස් කළල ආසාදනය කරන්න.
3. ආසාදිත කුකුල් මස් කළල විවෘත කර CAO සහ ඇලන්ටොයික් තරලය ලබා ගන්න.
4. ඇලන්ටොයික් තරලය සමඟ RGA බිංදුවක් තබන්න.
සිසුන්ගේ ස්වාධීන වැඩ:
අ) පෙර පාඩමේදී ආසාදිත කුකුල් මස් කළල විච්ඡේදනය කිරීම සඳහා සේවා ස්ථාන සහ විශේෂ ඇඳුම් සකස් කිරීම;
ආ) නිව්කාසල් රෝග වෛරසය ආසාදනය වූ කුකුල් මස් කළල විවෘත කිරීම, ඇලන්ටොයික් සහ ඇම්නියොටික් තරල උරා ගැනීම, බිංදු RGA වේදිකාගත කිරීම;
ඇ) වසූරිය වෛරසය ආසාදනය වූ කුකුල් මස් කළල විච්ඡේදනය, CAO නිස්සාරණය, පොක්මාක් ගණන් කිරීම සහ ඇඳීම;
d) උපකරණ, කළල, පිඟන් විෂබීජ නාශක සඳහා සූදානම් වීම.
1. කුකුල් මස් කළල වල වෛරස් පෙන්නුම් කරන ක්රම ගැන ඔබ දන්නේ කුමක්ද?
2. කුකුල් මස් කළල වලින් වෛරස් අඩංගු ද්රව්ය ලබා ගැනීමේ ක්රම මොනවාද?
3. වෛරස් වල hemagglutinating ගුණ සහ ඒවායේ භාවිතයන් මොනවාද? Hemagglutination යාන්ත්රණය කුමක්ද?
පාඩමේ අරමුණ:විවිධ භෝග වර්ග සහ ඒවායේ නාමකරණය අධ්යයනය කරන්න. සෛල සංස්කෘතීන් නිෂ්පාදනය සඳහා ද්රව්යමය සහාය අධ්යයනය කිරීම.
උපකරණ සහ ද්රව්ය:හැන්ක්ස් විසඳුම්. Erla, පෝෂක මාධ්යය 199, ඉඳිකටු, ලැක්ටල්බුමින් හයිඩ්‍රොලයිසේට්, මෙට්ට, කුප්පි, වීදුරු භාණ්ඩ, සූදානම් කළ සෛල සංස්කෘතීන්, බහුමාධ්‍ය උපකරණ, ඉදිරිපත් කිරීම් MS Office Power Pointපාඩමේ මාතෘකාව මත.
ගුරුවරයාගේ පැහැදිලි කිරීම.විවිධ ජීව විද්‍යාත්මක නිෂ්පාදන ලබා ගැනීම, පර්යේෂණ හෝ රෝග විනිශ්චය කටයුතු සිදු කිරීම සඳහා සෛල සංස්කෘතීන් වර්ධනය කිරීම 20 වැනි සියවසේ විප්ලවීය මොහොතකි. ඉහළ සතුන්ගේ පටක සෛල ශරීරයෙන් හුදකලා කළ හැකි අතර පසුව ඔවුන්ගේ වර්ධනය හා ප්රජනනය සඳහා කොන්දේසි නිර්මානය කළ හැකිය යන අදහස පිළිගැනීම 20 වන සියවසේ පළමු දශකය දක්වා දිව යයි. එවැනි ක්‍රියාවලීන් සැබෑ බව දැනගත් පසු, වැඩ කිරීමේ දෙවන අදියර ආරම්භ විය - සෛල වර්ධනය කිරීම සහ ඒවා තුළ වෛරස් ප්රතිනිෂ්පාදනය කිරීම. තුන්වන සහ සිව්වන අදියර ආරම්භ වන්නේ බාහිරින් ලබාගත් ජාන සෛල තුළට ඇතුළු කිරීමේ හැකියාව මතුවීමත් සමඟ ඒවායේ ප්‍රකාශනය ලබා ගැනීම සහ තනි සෛලයකින් (දෙමුහුන්, සංක්‍රාන්ති පද්ධති සහ ක්ලෝනකරණය ලබා ගැනීමේ හැකියාව සලකුණු කරන දෙමුහුන්) දැනට, සෛල සංස්කෘතියකින් තොරව එක වෛරස් විද්‍යාගාරයකටවත් කළ නොහැක සෛල සංස්කෘතීන්ට පහත සඳහන් දේ ඇත. වාසිරසායනාගාර සතුන් සහ කුකුල් කළල ඉදිරිපිට:
සියලුම සෛල සංස්කෘතීන්ගේ ආසාදනය සාක්ෂාත් කර ගත හැකි අතර එමඟින් ප්‍රෝටීන් බැලස්ට් හි අවම අන්තර්ගතය සහිත වෛරස් ඉහළම සාන්ද්රණය සහිත වෛරස් අඩංගු ද්රව්ය ලබා ගැනීමට හැකි වේ;
ඕනෑම සත්ව විශේෂයක සෛල සංස්කෘතීන් ලබා ගත හැකි බැවින්, වෛරස් වගා කිරීම සඳහා විශේෂ සීමාවන් ඉවත් කරනු ලැබේ;
ජීවන පද්ධතියේ අඛණ්ඩතාව උල්ලංඝනය නොකර ඕනෑම අවස්ථාවක ආසාදන ක්රියාවලියට මැදිහත් විය හැකිය;
ඔබට ආසාදන ක්රියාවලියේ ප්රගතිය අඛණ්ඩව නිරීක්ෂණය කළ හැකිය;
සංස්කෘතික ද්‍රවයක ස්වරූපයෙන් සූදානම් කළ වෛරස් අත්හිටුවීමක් ලබා ගත හැකිය;
සංස්කෘතික තරලය දිලීර හා බැක්ටීරියා වලට එරෙහිව සම්පූර්ණයෙන්ම වඳ වේ;
ආසාදන තාක්ෂණය සහ වෛරස් අඩංගු ද්රව්ය ලබා ගැනීම අතිශයින්ම සරල ය;
සාපේක්ෂ ලාභය.
සෛල සංස්කෘතීන් යනු වෛරස් වගා කිරීම සඳහා වඩාත්ම දියුණු රසායනාගාර පද්ධතියයි. වෛරස් විද්‍යාත්මක භාවිතයේදී, සෛල සංස්කෘතීන් බොහෝ විට භාවිතා කරනුයේ වෛරස් ප්රාථමික හඳුනා ගැනීම සහ ව්යාධිජනක ද්රව්ය වලින් හුදකලා කිරීම, එන්නත් සහ රෝග විනිශ්චය කිරීමේදී වෛරසය සමුච්චය කිරීම, රසායනාගාරයේ වෛරස් වික්රියා නඩත්තු කිරීම, වෛරස් වර්ග කිරීම සහ පරීක්ෂණයක් ලෙස ය. උදාසීන ප්රතික්රියාවේ වස්තුව.
වෛරසය සාර්ථකව හුදකලා කිරීම සඳහා, පහත සඳහන් කරුණු නිරීක්ෂණය කළ යුතුය: අවශ්යතා:
භාවිතා කරන සෛල සංස්කෘතිය සැක සහිත වෛරසයට සංවේදී විය යුතුය. සෛල තරුණ සතුන්ගෙන් (වඩාත් සුදුසු කළල) ලබා ගන්නේ නම් එහි සංවේදීතාව වැඩි වේ;
10.1 සෛල සංස්කෘතීන් වර්ග.සෛල සංස්කෘතිය යනු ශරීරයෙන් පිටත කෘතිම තත්වයන් යටතේ ජීවත් වන සහ ප්රජනනය කරන බහු සෛලීය ජීවියෙකුගේ සෛල වේ (in vitro).
වර්තමාන ශතවර්ෂයේ 40 ගණන්වලින් පසුව සෛල සංස්කෘතික තාක්ෂණය විශේෂයෙන් සාර්ථක ලෙස වර්ධනය වීමට පටන් ගත්තේය. පහත සඳහන් තත්වයන් මගින් මෙය පහසු විය: සෛල සංස්කෘතීන්ගේ බැක්ටීරියා ආසාදනය වළක්වන ප්රතිජීවක සොයා ගැනීම, සෛල නිශ්චිත විනාශයක් ඇති කිරීමට වෛරස් වලට ඇති හැකියාව (සයිටොපති ආචරණය) - හුවාං (1943) සහ එන්ඩර්ස් (1949) විසින් සොයා ගැනීම - පහසු ය. සෛල සංස්කෘතීන් තුළ වෛරස් දැක්වීමේ ක්රමය, අවසාන වශයෙන්, Dulbecco සහ Vogt (1952) විසින් පටක ට්‍රයිප්සිනීකරණය සහ තනි ස්ථර සෛල සංස්කෘතීන් ලබා ගැනීම සඳහා ක්රමයක් යෝජනා කරන ලදී.
වෛරස් විද්‍යාත්මක භාවිතයේදී පහත සඳහන් සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතා වේ.
ප්රාථමික ට්‍රයිප්සිනීකරණය වූ සෛල සංස්කෘතීන්- ශරීරයේ අවයව හෝ පටක වලින් සෘජුවම ලබාගත් සෛල, එක් ස්ථරයක vitro වර්ධනය වේ (රූපය 26). සෛල සංස්කෘතිය පුද්ගලයෙකුගේ හෝ සතෙකුගේ (වැඩිහිටි හෝ කළල) ඕනෑම අවයවයකින් හෝ පටකයකින් පාහේ ලබා ගත හැක. කෙසේ වෙතත්, කලල සෛල වලට වැඩි වර්ධන විභවයක් ඇති බැවින්, කලල ඉන්ද්‍රියයන්ගෙන් මෙය වඩා හොඳින් කළ හැක. බොහෝ විට, වකුගඩු, පෙනහළු, සම, තයිමස් සහ කළල හෝ තරුණ සතුන්ගේ වෘෂණ මෙම අරමුණු සඳහා භාවිතා වේ.
රූපය 26. බැටළු කළල පෙනහළු සෛලවල ප්රාථමික සංස්කෘතිය (එන්.අයි. ට්‍රොට්සෙන්කෝ et al.)
නිරෝගී සතෙකුගෙන් ප්රාථමික සෛල ලබා ගැනීම සඳහා, ඝාතනය කිරීමෙන් පැය 2-3 කට නොඅඩු, අනුරූප අවයව හෝ පටක ගෙන කැබලිවලට තලා (මි.මී. 1-4) එන්සයිම සමඟ ප්රතිකාර කරනු ලැබේ: ට්‍රිප්සින්, අග්න්‍යාශය, කොලජන්ස් සහ වෙනත් (සාමාන්යයෙන්. ට්‍රිප්සින්). එන්සයිම අන්තර් සෛලීය ද්රව්ය විනාශ කරන අතර, එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස තනි තනි සෛල පෝෂක මාධ්‍යයක අත්හිටුවා 37 °C උෂ්ණත්ව පාලකයක ඇති පරීක්ෂණ නල හෝ මෙට්ටවල අභ්‍යන්තර පෘෂ්ඨය මත වගා කෙරේ.
සෛල වීදුරුවට සම්බන්ධ වී බෙදීමට පටන් ගනී. සෛල සංස්කෘතීන් වර්ධනය කිරීමේදී, අදියර කිහිපයක් වෙන්කර හඳුනාගත හැකිය: අනුවර්තනය, ලඝුගණක වර්ධනය, ස්ථාවර සහ වයසට යාම (සෛල මරණය). ගුණ කරන අතරතුර, සෛල වීදුරු මතුපිට තබා ඇති අතර එය එක් ස්ථරයකින් සම්පූර්ණයෙන්ම ආවරණය වන විට, ඔවුන් එකිනෙකා සමඟ සම්බන්ධ වී බෙදීම නතර කරයි (ස්පර්ශ නිෂේධනය). වීදුරුව මත එක් සෛල ඝන තට්ටුවක් සෑදී ඇත (එබැවින්, මෙම සෛල සංස්කෘතීන් තනි ස්ථර හෝ ඒකස්ථර ලෙස හැඳින්වේ).
සාමාන්යයෙන්, 3-5 දින තුළ monolayer පිහිටුවා ඇත. එය සෑදීමේ වේගය පටක වර්ගය, සත්වයාගේ වයස, පෝෂක මාධ්යයේ ගුණාත්මකභාවය, සෛලවල බීජ සාන්ද්රණය සහ වෙනත් සාධක මත රඳා පවතී.
සෛල අපද්‍රව්‍ය සමඟ දූෂිත වන බැවින් පෝෂක මාධ්යය වෙනස් වේ. ඒකස්ථරය දින 7-21 දක්වා ශක්යව පවතී (සෛල වර්ගය සහ පෝෂක මාධ්යයේ සංයුතිය අනුව).
සෛල ප්‍රතිනිෂ්පාදනයේ තීව්‍රතාවය සහ ඒක ස්ථරයේ තත්වය අඩු විශාලන අන්වීක්ෂයක් (x10 කාච) යටතේ දෘශ්‍යමය වශයෙන් නිරීක්ෂණය කෙරේ. මෙම කාර්යය සඳහා ප්රතිලෝම අන්වීක්ෂයක් භාවිතා කිරීම වඩා හොඳය.
වෛරස් වගා කිරීම සඳහා, තරුණ සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතා කරනු ලැබේ (ඒක ස්ථරයක් සෑදූ වහාම).
උප සංස්කෘතීන්.වෛරස් විද්‍යාත්මක භාවිතයේදී, උප සංස්කෘතීන් බොහෝ විට භාවිතා කරනු ලබන අතර, මෙට්ට වල වැඩෙන ප්රාථමික සෛල වලින් ලබා ගන්නා ඒවා වීදුරුවලින් වර්සීන් හෝ ට්‍රිප්සින් ද්රාවණයකින් ඉවත් කර, නව පෝෂක මාධ්‍යයකින් නැවත සකස් කර නව මෙට්ට හෝ පරීක්ෂණ නල මත නැවත සකස් කර ඇත. දින 2-3 කට පසු, ඒකාධිකාරයක් සෑදී ඇත.
ප්රායෝගිකව, සියලුම ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතීන්ගෙන් උප සංස්කෘතියක් ලබා ගත හැකිය. (චිකන් ෆයිබ්රොබ්ලාස්ට් වඩාත් නරක ලෙස උපසංස්කෘතීකරණය වී ඇත.) ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතීන්ට වෛරස් වලට සංවේදීතාවයෙන් උප සංස්කෘතීන් පහත් නොවේ; ඊට අමතරව, ඒවා වඩාත් ලාභදායී වන අතර වෛරස් සමඟ සෛල දූෂණය හඳුනා ගැනීමට හැකි වේ. උප සංස්කෘතීන් 2-5 ඡේද (බද්ධ කිරීම්) සහ ඉතා කලාතුරකින් 8-10 දක්වා ලබා ගනී. පසුකාලීන ඡේද සෛල රූප විද්‍යාවේ වෙනස්වීම් සහ ඒවායේ මරණයට හේතු වේ .
සෛල සංස්කෘතීන් ඡේද 10 කට වඩා වැඩි ගණනක් හරහා ගොස් තිබේ නම්, ඒවා දැනටමත් අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන් වෙත සංක්‍රමණය වීමේ අදියරේ පවතී.
අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන්- මේවා ශරීරයෙන් පිටත දින නියමයක් නොමැතිව ප්රජනනය කළ හැකි සෛල වේ. රසායනාගාරවල ඒවා එක් යාත්‍රාවකින් තවත් භාජනයකට උප සංස්කෘතියක් මගින් නඩත්තු කරනු ලැබේ (පෝෂක මාධ්ය ප්රතිස්ථාපනය කිරීමට යටත්ව).
යම් වගා ක්රමයක් තුළ දීර්ඝ කාලීන උප සංස්කෘතීන් හරහා වර්ධන ක්‍රියාකාරකම් වැඩි කරන ලද ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතීන්ගෙන් අඛණ්ඩ සෛල ලබා ගනී. සාමාන්යයෙන්, නව සෛල රේඛා ලබා ගැනීම සඳහා වැඩ මාස කිහිපයක් පවතී. අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන්හි මූලාරම්භයේ යාන්ත්රණය සෛලවල ජානමය විචල්‍යතාවයේ ප්රතිඵලයක් හෝ ප්රාථමික ආරම්භක සංස්කෘතියේ පවතින තනි සෛල තෝරා ගැනීමක් බව විශ්වාස කෙරේ.
බද්ධ කරන ලද සංස්කෘතීන්ගේ සෛල එකම හැඩයක් ඇත, heteroploid වර්ණදේහ කට්ටලයක් (ප්රාථමික සෛල තුළ එය diploid වේ), vitro වර්ධන තත්ත්වයන් යටතේ ස්ථායී වේ, සමහර ඒවා පිළිකාකාරක ක්‍රියාකාරකම් ඇත. අවසාන ගුණාංගය එන්නත් නිෂ්පාදනයේදී වෛරස් වගා කිරීම සඳහා අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන් භාවිතා කිරීම සීමා කරයි.
නිරෝගී සත්ව පටක සහ පිළිකා පටක යන දෙකෙන්ම අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන් ලබා ගත හැකිය. මේවා අතර බහුලව භාවිතා වන සෛල රේඛා වන්නේ: HeLa (කාන්තාවකගේ ගැබ්ගෙල පිළිකාවෙන්); Ner-2 (මිනිස් ස්වරාල පිළිකාවෙන්); KB (මුඛ පිළිකාවෙන්); VNK-21 (අලුත උපන් හැම්ස්ටර් වකුගඩු); PPES (බද්ධ ඌරු භ්රෑණ වකුගඩු); PPT (බද්ධ කළ වසු වකුගඩු); PPO (බැටළු වකුගඩු); TR (ගවයින්ගේ ට්රේචල් ශ්ලේෂ්මලයෙන්); L (මූසික ෆයිබ්රොබ්ලාස්ට්); SOC (cynomolgus වඳුරාගේ හදවතේ සිට) ආදිය.
බද්ධ කරන ලද සෛල ප්රාථමික ඒවාට වඩා වාසි ඇත: ඒවා සකස් කිරීම වඩා සරල ය, ශ්රමය සහ ද්රව්යමය සම්පත් ඉතිරි වේ; මෙම සංස්කෘතීන් ගුප්ත වෛරස් සහ මයික්‍රොෆ්ලෝරා තිබීම සඳහා කල්තියා පරීක්ෂා කළ හැකිය; සෛල මිශ්ර ජනගහනයක් නියෝජනය කරන ප්රාථමික රේඛා වලට වඩා ක්ලෝන රේඛා වෛරස් ප්‍රචාරණය සඳහා වඩාත් සම්මත කොන්දේසි සපයයි. බොහෝ බද්ධ කරන ලද සෛල වලට අනුරූප ප්රාථමික සංස්කෘතීන්ට වඩා වෛරස් වලට සංවේදීතාවයේ පුළුල් වර්ණාවලියක් ඇත.
කෙසේ වෙතත්, බද්ධ කරන ලද සෛල ද අවාසි ඇත: ඒවා මාරාන්තික වීමට ගොදුරු වේ, එනම්, සම්භවය නොසලකා මාරාන්තික පරිහානිය, සහ වෛරස් වලට සංවේදීතාව අඩුවීම ප්රාථමික සෛල වලට වඩා වේගයෙන් ඒවා තුළ සිදු වේ, එබැවින් බද්ධ කළ ක්ලෝන රේඛා භාවිතා කිරීම අවශ්ය වේ. සෛල.
බද්ධ කරන ලද සෛල වරින් වර නැවත සිටුවීමෙන් නඩත්තු කෙරේ. කේන්ද්රාපසාරී-නිදහස් ක්රමය බොහෝ විට භාවිතා වේ. මීළඟ උප සංස්කෘතිය සඳහා, හොඳ ඒකාධිකාරයක් සහිත 2-3-දින සංස්කෘතියක් තෝරා ගනු ලැබේ, පෝෂක මාධ්ය ජලය බැස යන අතර, සෛල ඒකාධිකාරය 35-37 ° C දක්වා රත් කරන ලද 0.02% versene ද්රාවණයකින් ආවරණය කර ඇත. වීදුරුවට සෛල ඇමිණීම ප්‍රවර්ධනය කරන සහ සෛල සංස්කෘතියේ අඛණ්ඩතාව සහතික කරන ද්විසංයුජ කැටායන (Mg ++, Ca ++) බන්ධනය කිරීම මගින් Verse හි විසුරුවා හැරීමේ බලපෑම පැහැදිලි කෙරේ. පදයේ බලපෑම යටතේ, සෛල වටකුරු සහ වීදුරු වලින් වෙන් කර ඇත.
සෛල වට කර මිනිත්තු 10-15 කට පසු, පදය ජලය බැස, එයින් කුඩා ප්‍රමාණයක් ඉතිරි කර (ලීටර් 1 මෙට්ටයක - 5-10 මිලි, ලීටර් 0.1 මෙට්ටයක - මිලි ලීටර් 2-3), සහ තවත් එකක් සඳහා තබා ඇත. මිනිත්තු 5-10 ක්, වරින් වර වර්‍යාවෙන් සෛල සේදීම, පසුව පෝෂක මාධ්ය කුඩා ප්‍රමාණයක් එකතු කිරීම. සෙලවීමෙන් පසු, සෛල Goryaev කුටියේ ගණන් කරනු ලැබේ, ආරම්භක සෛල අත්හිටුවීම වර්ධන පෝෂක මාධ්‍යයකින් අවශ්ය සාන්ද්‍රණයට (මිලි ලීටර් 1 කින් 80-200 දහසක්) තනුක කර රබර් නැවතුම් වලින් වසා ඇවිස්සීමත් සමඟ පරීක්ෂණ නල හෝ මෙට්ට වලට වත් කරනු ලැබේ. අඛණ්ඩ ඒකාධිකාරයක් සාදනු ලබන තෙක් දින 3-4 ක් සඳහා 37 ° C උෂ්ණත්වයකදී උෂ්ණත්ව පාලකයක වගා කෙරේ. සාමාන්යයෙන්, Goryaev කුටියේ සෛල ගණන් නොගනී, නමුත් සෛල වර්ගය අනුව 1: 2 සිට 1: 6 දක්වා අනුපාතයකින් උප සංස්කෘතියක් ඇත. පෝෂක මාධ්යයේ සංයුතිය ද සෛල වර්ගය මත රඳා පවතී, නමුත් බොහෝ විට බද්ධ කළ හැකි සෛල වගා කිරීමේදී ඊගල් 199 මාධ්ය හෝ ලැක්ටල්බුමින් හයිඩ්‍රොලයිසේට් සමඟ මෙම මාධ්‍යවල මිශ්‍රණ භාවිතා වේ.
බද්ධ කරන ලද සෛල ක්‍රමානුකූලව නැවත සිටුවීමෙන් නඩත්තු කිරීමේදී, අවසාන ඡේදය නුසුදුසු නම් අවම වශයෙන් එක් මෙට්ටයක් උප සංස්කෘතියකින් තොරව රසායනාගාරයේ ඉතිරි වන බව සැලකිල්ලට ගැනීම වැදගත්ය.
ඩිප්ලොයිඩ් සෛල සංස්කෘතීන්.සෛල සංස්කෘතිය පිළිබඳ ජාත්‍යන්තර කමිටුව ඩිප්ලොයිඩ් සෛල සඳහා පහත නිර්වචනය ලබා දුන්නේය: එය සෛලවල රූප විද්‍යාත්මකව සමජාතීය ජනගහනයක් වන අතර එය vitro වගාවේදී ස්ථායී වේ, සීමිත ආයු කාලයක් ඇත, වර්ධන අවධීන් තුනකින් සංලක්ෂිත වේ, ගමන් කිරීමේදී මුල් පටකයේ karyotype ලක්ෂණය ආරක්ෂා කරයි. , අපවිත්‍ර ද්රව්ය වලින් තොර සහ හැම්ස්ටර් වලට බද්ධ කළ විට පිළිකාකාරක ක්‍රියාකාරකම් නොමැති වීම.
ඩිප්ලොයිඩ් සෛල සංස්කෘතීන් මෙන්ම අඛණ්ඩ ඒවා ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතීන්ගෙන් ලබා ගනී. සෛලවල karyotype ඉතා ලේබල් වන අතර සාම්ප්රදායික සෛල සංස්කෘතික ක්රම සමඟ එය පළමු දින තුළ වෙනස් වේ. එබැවින්, ඩිප්ලොයිඩ් තත්වයේ දී vitro හි සෛල දිගු කාලීනව නඩත්තු කිරීම සඳහා පටක සැකසීමේ විශේෂ ක්රම, උසස් තත්ත්වයේ පෝෂක මාධ්ය සහ භ්රෑණ සෙරුමය අවශ්ය විය. මෙම ගැටළුව ප්රථම වරට ඇමරිකානු විද්යාඥයින් වන Hayflick සහ Moorhead (1961) විසින් සාර්ථකව විසඳන ලදී.
ඩිප්ලොයිඩ් සෛල මිනිස් කළල (පෙනහළු, වකුගඩු, මාංශ පේශි පටක, හදවත, ආදිය) සහ සතුන් (ගවයින්, ඌරන්, BHK-21 - හැම්ස්ටර් වකුගඩු, ආදිය) විවිධ පටක වලින් ලබා ගනී.
ඩිප්ලොයිඩ් සෛල, බද්ධ කළ හැකි ඒවා මෙන් නොව, සීමිත ගමන් කිරීමේ හැකියාව ඇත. උපරිම ඡේද ගණන 50± 10 වේ, එවිට බෙදීමේ සෛල ගණන තියුනු ලෙස අඩු වන අතර ඒවා මිය යයි. කෙසේ වෙතත්, ඩිප්ලොයිඩ් සෛල දිගු කාලයක් භාවිතා කළ හැකිය, මන්ද සෑම ඡේදයකම සමහර සෛල ශීත කළ හැක (ඍණ 196 ° C) සහ, අවශ්ය නම්, ප්රතිෂ්ඨාපනය කළ හැක.
ඩිප්ලොයිඩ් සෛල බද්ධ කරන ලද සහ ප්රාථමික සෛල වලට වඩා වාසි ඇත: පෝෂක මාධ්යය වෙනස් නොකර 10-12 දින සඳහා ශක්ය තත්වයක සිටිය හැක; සතියකට වරක් මාධ්යය වෙනස් කරන විට, ඔවුන් සති 4 ක් සඳහා ශක්යව පවතී; වෛරස් දිගු කාලීනව වගා කිරීම සඳහා ඒවා විශේෂයෙන් සුදුසු ය; ඒවා වෛරස් වලට මුල් පටක වල සංවේදීතාව රඳවා ගනී.
අත්හිටුවීමේ සෛල සංස්කෘතීන්. 1953 දී, Owen et al. නිදහසේ අත්හිටුවන ලද තත්වයක සෛල ගුණ කිරීමේ හැකියාව පෙන්නුම් කළේය. පසු වසරවලදී, මෙම ක්රමය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩිදියුණු කරන ලදී: දැඩි ලෙස නිශ්චිත පරාමිතීන් (උෂ්ණත්වය, pH අගය, මිශ්ර කිරීමේ වේගය) සහිත සෛල ප්රතිනිෂ්පාදනය සහතික කරන නවීන උපකරණ නිර්මාණය කරන ලද අතර, මෙම කොන්දේසි යටතේ ප්රජනනය සඳහා අඛණ්ඩ සෛල රේඛා බොහොමයක් අනුවර්තනය කරන ලදී (VNK-21 , Her-2 , MDVC, ආදිය). අත්හිටුවීමේ සෛල සංස්කෘතීන් තුළ වර්ධනය වන වෛරස් එන්නත් සහ රෝග විනිශ්චය කාර්මික නිෂ්පාදනයේ විශාල අවස්ථාවන් විවෘත කරයි. කෙසේ වෙතත්, බද්ධ කළ හැකි සෛල පමණක් අත්හිටුවීම තුළ හොඳින් වගා කර ඇත.
අත්හිටුවීම තුළ සෛල වගා කිරීම සඳහා නව ප්රවේශයක් වන්නේ ක්ෂුද්ර වාහක (Sephadex, silica gel, Cytolar, ආදිය) භාවිතා කිරීමයි. ක්ෂුද්ර වාහක මත, සංස්කෘතික සෛල ඒක ස්ථරයක් සාදයි. මේ අනුව, මෙම ක්රමය මඟින් ඝණ උපස්ථරයකට ඇමිණීම මත රඳා පවතින සෛල වර්ධනය කිරීමට අත්හිටුවීමේ වගා ක්‍රමවලට ඉඩ සලසයි: ප්රාථමික, උප සංස්කෘතීන්, ඩිප්ලොයිඩ්. මෙම සෛල මතුපිට යැපෙන ලෙස හැඳින්වේ.
ක්ෂුද්ර වාහක මත වගා කිරීමේ ක්රමය (රූපය 27) දැනට අතිශයින් ජනප්‍රිය වන අතර, එය සෛල ජෛව තාක්‍ෂණයේ, එන්නත් සහ අනෙකුත් ජීව විද්‍යාත්මකව ක්‍රියාකාරී ද්රව්ය (ඉන්ටර්ෆෙරෝන්, හෝමෝන, ආදිය) නිෂ්පාදනය කිරීමේදී විශාල අපේක්ෂාවන් විවෘත කරයි.
රූපය 27. ක්ෂුද්ර වාහක මත සෛල වගා කිරීම (ක්රමය)
10.2 සෛල සංස්කෘතීන් ගබඩා කිරීම.ප්‍රධාන සෛල සංස්කෘතීන් තුනෙන් එකක් - ප්රාථමික සංස්කෘතීන්, ඩිප්ලොයිඩ් වික්රියා සහ වෛරස් අධ්‍යයනයන්හි භාවිතා වන අඛණ්ඩ සෛල රේඛා බොහෝ විට සංරක්ෂණය කළ යුතුය, මන්ද යත්, වීට්‍රෝ හි සෛල දිගු කාලීනව ගමන් කිරීමත් සමඟ බැක්ටීරියා දූෂණය හා පාලනයකින් තොරව (ජානමය) වෙනස්කම් ඇතිවීමේ අවදානමක් ඇත. සෛල තුළම.
සෛල සංස්කෘතීන් සංරක්ෂණය කිරීමේ සරලම ක්රමය වන්නේ සති 1-6 දක්වා 4 ° C දී ගබඩා කිරීමයි. වියළි අයිස් (ඍණ 78 ° C) සහ ද්රව නයිට්රජන් (ඍණ 196 ° C) තත්වයන් යටතේ සෛල වික්රියා ගබඩා කිරීම සාර්ථකව භාවිතා කර ඇත. මෙය සිදු කිරීම සඳහා, සෛල මෙට්ට වලින් ඉවත් කර, 10-40% සෙරුමය සහ 10% පිරිසිදු වඳ ග්ලිසරින් අඩංගු පෝෂක මාධ්‍යයක මිලි ලීටර් 10 6 ක සාන්ද්‍රණයකින් ආරක්ෂිත ද්රව්ය ලෙස අත්හිටුවනු ලැබේ (ඩීඑම්එස්ඕ - ඩයිමෙතයිල් සල්ෆොක්සයිඩ් ඒ වෙනුවට සාර්ථකව භාවිතා කරයි. ග්ලිසරින්). ඉන්පසු සෛල අත්හිටුවීම ඇම්පියුලස් වලට වත් කර, මුද්‍රා තබා පැය 1-3 ක් 4 ° C දී තබා ඇත, ඉන්පසු සෛල එතිල් ඇල්කොහොල් සහ වියළි අයිස් මිශ්‍රණයක ශීත කළ යුතුය. සිසිලන වේගය විනාඩියකට 1 ° C නොඉක්මවිය යුතුය. උෂ්ණත්වය සෘණ 25 ° C දක්වා පහත වැටෙන විට, ගබඩා කිරීම සඳහා ඇම්පියුලස් වියළි අයිස්වල තබා ඇත. ගබඩා කිරීම සඳහා ද්රව නයිට්රජන් භාවිතා කරන්නේ නම්, සෛල සහිත ඇම්පියුලස් ඍණ 70 ° C දක්වා සිසිල් කර ද්රව නයිට්රජන් තුළට දමනු ලැබේ. ද්රව නයිට්රජන් වල සෛල වසර ගණනාවක් ගබඩා කිරීමෙන් ඒවායේ ප්‍රජනන ක්‍රියාකාරකම් හෝ වෛරස් වලට ඇති සංවේදීතාව වෙනස් නොවේ.
ශීත කළ සෛල පහත පරිදි ප්‍රතිසාධනය කරනු ලැබේ: ශීත කළ සෛල සහිත ඇම්පියුලය මිනිත්තු 1-2 ක් මෘදු සෙලවීමකින් ඉක්මනින් ජල ස්නානයක ගිල්වනු ලැබේ, පසුව සෛල මෙට්ටයකට වත් කරනු ලැබේ, සුදුසු වර්ධන මාධ්ය ප්‍රමාණය එකතු කර තාප ස්ථායයක වගා කරනු ලැබේ. 37 ° C දී. Glycerol හෝ DMSO ඉවත් කිරීම සඳහා, වපුරන දිනට පසු දින වගා මාධ්යය ප්රතිස්ථාපනය වේ.
සෛල ප්රවාහනය කරන විට, වැඩුණු මොනොලේයරයක් සහිත මෙට්ට මාධ්‍යයෙන් ඉහළට පුරවා රබර් නැවතුමකින් වසා ඇත. රසායනාගාරයේදී, පෝෂක මාධ්යය ජලාපවහනය කර මෙම සෛල වගා කිරීමේදී මෙම රසායනාගාරයේ භාවිතා කරන පෝෂක මාධ්‍යයට ආකලන ආකාරයෙන් භාවිතා කරයි.
සෛල අත්හිටුවීම් ද 4 °C දී ප්රවාහනය කළ හැක. හිතකර ප්‍රවාහන තත්ව යටතේ, අධික උනුසුම් වීම සහ සෛල කැටි කිරීම හැර, ඒවායින් 80-90% දින 7-8 දක්වා ශක්යව පවතී.
සෛල සංස්කෘතිය සමඟ වැඩ කිරීම සඳහා නිරපේක්ෂ වඳභාවය, වීදුරු භාණ්ඩ ප්රවේශමෙන් සකස් කිරීම, සුදුසු විසඳුම්, පෝෂක මාධ්ය සහ උසස් තත්ත්වයේ ජලය අවශ්ය වේ.
10.3 සෛල සංස්කෘතීන් දූෂණය වීම.සෛල සංස්කෘතීන් සමඟ වැඩ කිරීම, වෛරස් හා අනෙකුත් අධ්යයනවලදී සහ ජෛව තාක්ෂණය තුළ ඔවුන්ගේ භාවිතය විදේශීය නියෝජිතයන් (දූෂක) නොමැතිකම සඳහා නිරන්තර අධීක්ෂණය අවශ්ය වේ. දූෂක වෛරස්, බැක්ටීරියා, දිලීර, මයිකොප්ලාස්මා සහ අනෙකුත් සෛල සංස්කෘතීන්ගේ සෛල විය හැක. මයිකොප්ලාස්මා යනු වඩාත් සුලභ දූෂක වලින් එකකි, විශේෂයෙන් අඛණ්ඩ සෛල රේඛාවල. සෛල සංස්කෘතියේ ඒවා, අනෙකුත් ක්ෂුද්ර ජීවීන් හෝ වෛරස් කාලෝචිත ලෙස හඳුනා ගැනීම දෙවැන්නෙහි ඉහළ ගුණාත්මකභාවය පවත්වා ගැනීම සඳහා වැදගත් කොන්දේසියකි. ස්ථායී සෛල රේඛා සහතික කිරීම සඳහා අවශ්ය පරීක්ෂණයක් ලෙස, මයිකොප්ලාස්මා දූෂණය නොමැතිකම පාලනය කිරීම ඇතුළත් වේ, එය සෛල සංස්කෘතීන් සමඟ වැඩ කරන සියලුම රසායනාගාර සඳහා අනිවාර්ය විය යුතුය.
සංස්කෘතික ප්ලාස්ක් වල පෝෂක මාධ්යයේ තියුණු ආම්ලිකතාවය සහ එහි opalescence මයිකොප්ලාස්මා සමඟ සෛල සංස්කෘතීන් දූෂණය වීමේ ප්‍රතිවිපාකයක් විය හැකිය. දෙවැන්න හඳුනා ගැනීම සඳහා පහත සඳහන් ක්රම භාවිතා කරනු ලැබේ: පෝෂක මාධ්ය මත එන්නත් කිරීම, පරීක්ෂණ සංස්කෘතීන්, සෛල විද්‍යාත්මක, ස්වයංක්‍රීය විකිරණ සහ ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂ.
දූෂණය වූ විට, සෛල සංස්කෘතීන් විනාශ වන අතර, දියර නයිට්රජන් වල ගබඩා කර ඇති රක්ෂිත බීජ පැල වලින් වගාව නැවත ආරම්භ වේ. නිර්දූෂණයට යටත් වන්නේ දුර්ලභ හා අද්විතීය භෝග පමණි.
එය භාවිතා කිරීමට පෙර වහාම වර්ධන මාධ්ය වෙත එකතු කරන ලද ක්ෂුද්ර ජීවී ඖෂධ (ප්රතිජීවක, ආදිය) ආධාරයෙන් සෛල සංස්කෘතියට අහම්බෙන් ඇතුල් වන බැක්ටීරියා ප්රතිනිෂ්පාදනය වැළැක්වීම සහ මර්දනය කළ හැකිය. මෙම ඖෂධ දැඩි ලෙස මාත්රා කළ යුතු අතර වෙනස් ලෙස භාවිතා කළ යුතුය. විශාල පරිමාණයේ අත්හිටුවීමේ සෛල වගාව, අඛණ්ඩ සෛල මහා පරිමාණ නිෂ්පාදනය වගා කිරීම මෙන්ම සෛලීය ද්රව්ය ඒකාබද්ධ කිරීමේ සෑම අවස්ථාවකදීම ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතීන් ලබා ගැනීමේ ක්රියාවලියේදී දූෂණය වීමේ අවදානම වැඩි වන විට ඔවුන්ගේ භාවිතය අවශ්ය කොන්දේසියකි.
සෛල සංස්කෘතීන් සමඟ වැඩ කරන විට, බොහෝ ප්‍රති-ක්ෂුද්ර ජීවී (විෂ නොවන) ඖෂධ ප්‍රශස්ත මාත්‍රාවලින් භාවිතා කරනු ලැබේ, ඒවායේ ක්‍රියාකාරීත්වයේ ස්වභාවය වගුව 5 හි දක්වා ඇත. ඵලදායී ඖෂධයක් හෝ ඖෂධ සංකීර්ණයක් තෝරාගැනීම ඒවාට විශේෂිත දූෂකවල සංවේදීතාව මත රඳා පවතී. .
වගුව 5.
සෛල සංස්කෘතීන් සඳහා ක්ෂුද්ර ජීවී ඖෂධ (L. P. Dyakonov සහ වෙනත්)
සකස් කිරීමේ තාක්ෂණය මත පදනම්ව, සෛල සංස්කෘතීන් වර්ගීකරණය කර ඇත:
- තනි තට්ටුවක්- සෛල රසායනිකව උදාසීන වීදුරු හෝ ප්ලාස්ටික් මතුපිටට සම්බන්ධ කිරීමට සහ ගුණ කිරීමට හැකි වේ.
- අත්හිටුවීම- එය මිශ්ර වූ විට පෝෂක මාධ්යයේ මුළු පරිමාව පුරාම සෛල ගුණ කරයි.
- අවයවය- ශරීරයෙන් පිටත ඒවායේ මුල් ව්‍යුහය රඳවා තබා ගන්නා අවයව සහ පටක වල සම්පූර්ණ කොටස් (සීමිත භාවිතය).
වඩාත් පුලුල්ව පැතිර ඇත ඒක ස්ථර සෛල සංස්කෘතීන්, කුමන ශක්ය පරම්පරා ගණන අනුව බෙදිය හැක
1) ප්රාථමික (මූලික වශයෙන් ට්‍රිප්සිනීකරණය කරන ලද),
2) අර්ධ ලිනන් (ඩිප්ලොයිඩ්)
3) බද්ධ කළ හැකි.
සම්භවය අනුවඒවා කළල, ගෙඩි සහ වැඩිහිටි ජීවීන් ලෙස වර්ගීකරණය කර ඇත.
morphogenesis මගින්- ෆයිබ්රොබ්ලාස්ටික්, අපිච්ඡද, ආදිය.
ප්රාථමිකසෛල සංස්කෘතීන් යනු විශේෂ පෝෂක මාධ්‍යයකින් ආලේප කරන ලද ප්ලාස්ටික් හෝ වීදුරු මතුපිටක් මත ඒක ස්ථරයක ස්වරූපයෙන් වර්ධනය වීමට හැකියාව ඇති ඕනෑම මානව හෝ සත්ව පටකයක සෛල වේ. එවැනි භෝග වල ආයු කාලය සීමිතය. එක් එක් විශේෂිත අවස්ථාවක, ඒවා යාන්ත්රික ඇඹරීම, ප්රෝටෝලිටික් එන්සයිම සමඟ ප්රතිකාර කිරීම සහ සෛල සංඛ්යාව ප්රමිතිකරණය කිරීමෙන් පසුව පටක වලින් ලබා ගනී. වඳුරු වකුගඩු, මිනිස් කළල වකුගඩු, මිනිස් ඇම්නියන් සහ කුකුල් මස් කළල වලින් ලබාගත් ප්රාථමික සංස්කෘතීන් වෛරස් හුදකලා කිරීම සහ සමුච්චය කිරීම සඳහා මෙන්ම වෛරස් එන්නත් නිෂ්පාදනය සඳහා බහුලව භාවිතා වේ.
අර්ධ සම් සහිත(හෝ ඩිප්ලොයිඩ් ) සෛල සංස්කෘතීන් - එකම වර්ගයේ සෛල, ඒවායේ මුල් ඩිප්ලොයිඩ් වර්ණදේහ කට්ටලය පවත්වා ගනිමින්, vitro තුළ ඡේද 50-100 දක්වා ඔරොත්තු දිය හැකිය. මානව කළල ෆයිබ්රොබ්ලාස්ට් වල ඩිප්ලොයිඩ් වික්රියා වෛරස් ආසාදන රෝග විනිශ්චය සඳහා සහ වෛරස් එන්නත් නිෂ්පාදනය සඳහා යොදා ගනී. බොහෝ විට, මිනිස් කළල (WI-38, MRC-5, IMR-9), ගවයින්, ඌරන්, බැටළුවන් ආදියෙන් ෆයිබ්රොබ්ලාස්ට් වල සංස්කෘතීන් භාවිතා කරනු ලැබේ.
අඛණ්ඩසෛල රේඛා විභව අමරණීය භාවය සහ විෂමාංශික කාරියෝටයිප් මගින් සංලක්ෂිත වේ. අඛණ්ඩ රේඛාවල මූලාශ්රය ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතීන් විය හැකිය(උදාහරණයක් ලෙස, SOC - සයිනමොබස් වඳුරෙකුගේ හදවත, PES - ඌරු කළලයක වකුගඩු, BNK-21 - දිනක් වයසැති සිරියානු හැම්ස්ටර්ගේ වකුගඩු වලින්; PMS - ගිනියා ඌරෙකුගේ වකුගඩුවෙන්, Vero - හරිත වඳුරෙකුගේ වකුගඩුව යනාදිය) තනි සෛල වල නිමක් නැති ප්‍රජනන ප්‍රවණතාවක් ඇත. සෛල වලින් එවැනි ලක්ෂණ පෙනුමට තුඩු දෙන වෙනස්කම් මාලාව පරිවර්තනය ලෙස හැඳින්වේ, අඛණ්ඩ පටක සංස්කෘතීන්ගේ සෛල පරිවර්තනය ලෙස හැඳින්වේ. අඛණ්ඩ සෛල රේඛා වල තවත් ප්‍රභවයකි malignant neoplasms. මෙම අවස්ථාවේ දී, සෛල පරිවර්තනය vivo තුළ සිදු වේ. බද්ධ කරන ලද සෛල පහත දැක්වෙන රේඛා බොහෝ විට වෛරස් පරිචය තුළ භාවිතා වේ: HeLa - ගැබ්ගෙල පිළිකාවෙන් ලබා ගන්නා ලද; Ner-2 - ස්වරාලය පිළිකාවෙන්; Detroit-6 - පෙනහළු පිළිකා metastasis සිට ඇට මිදුළු දක්වා; RH - මිනිස් වකුගඩු වලින්, KB - මුඛ කුහරයේ පිළිකා, RD - මානව rhabdomyosarcoma.
අවයව සංස්කෘතීන්- වඳ තත්ත්වයන් යටතේ සකස් කරන ලද සත්ව ඉන්ද්‍රිය කොටස් වන අතර ඒවා විශේෂිත වගා තත්වයන් යටතේ නිශ්චිත කාලයක් (දින, සති) ඔවුන්ගේ වැදගත් කාර්යයන් රඳවා ගනී.
වෛරස් වගා ක්රම.
වෛරස් වගා කිරීම සඳහා සෛල සංස්කෘතීන්, කුකුල් මස් කළල සහ සංවේදී රසායනාගාර සතුන් භාවිතා කරනු ලැබේ. කෘතිම පෝෂක මාධ්ය මත වර්ධනය නොවන අනිවාර්ය අන්තර් සෛලීය බැක්ටීරියා - rickettsia සහ chlamydia වගා කිරීම සඳහා ද එම ක්රම භාවිතා වේ.
සෛල සංස්කෘතීන්.සෛල සංස්කෘතීන් සත්ව හෝ මිනිස් පටක වලින් සකස් කර ඇත. සංස්කෘතීන් ප්රාථමික (බද්ධ නොවන), අර්ධ බද්ධ සහ බද්ධ ලෙස බෙදා ඇත.
ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතිය සකස් කිරීමඅනුක්‍රමික අදියර කිහිපයකින් සමන්විත වේ: පටක ඇඹරීම, ට්‍රයිප්සිනීකරණය මගින් සෛල වෙන් කිරීම, ට්‍රයිප්සින් වලින් හුදකලා වූ සෛල සමජාතීය අත්හිටුවීම සේදීම, පසුව සෛල වර්ධනය සහතික කරන පෝෂක මාධ්‍යයක අත්හිටුවීම, උදාහරණයක් ලෙස, මධ්‍යම 199 එකතු කිරීම සමඟ පැටවාගේ සෙරුමය.
බද්ධ බෝගප්‍රාථමික ඒවාට ප්‍රතිවිරුද්ධව, ඒවා vitro හි නිරන්තර පැවැත්ම සහතික කරන කොන්දේසි වලට අනුවර්තනය වී ඇති අතර ඡේද දුසිම් කිහිපයක් සඳහා සංරක්ෂණය කර ඇත.
අඛණ්ඩ ඒකස්ථර සෛල සංස්කෘතීන් සකස් කරනු ලබන්නේ මාරාන්තික සහ සාමාන්ය සෛල රේඛා වලින් වන අතර ඒවා යම් යම් තත්වයන් යටතේ දීර්ඝ කාලයක් vitro තුළ ගුණ කිරීමේ හැකියාව ඇත. මේවාට මුලින් ගැබ්ගෙල පිළිකාවෙන් හුදකලා වූ මාරාන්තික HeLa සෛල, Hep-3 (ලිම්ෆොයිඩ් පිළිකා වලින්) මෙන්ම මිනිස් ඇම්නියන් වල සාමාන්ය සෛල, වඳුරු වකුගඩු ආදිය ඇතුළත් වේ.
අර්ධ මාරු කළ හැකි භෝග සඳහාමානව ඩිප්ලොයිඩ් සෛල ඇතුළත් වේ. ඒවා ඡේද 50 ක් තුළ (වසරක් දක්වා) රඳවා තබා ගන්නා සෛලීය පද්ධතියකි, භාවිතා කරන පටකවල සෝමාටික් සෛල සඳහා සාමාන්ය වර්ණදේහවල ඩිප්ලොයිඩ් කට්ටලයක්. මිනිස් ඩිප්ලොයිඩ් සෛල මාරාන්තික පරිවර්තනයකට භාජනය නොවන අතර මෙය පිළිකා සෛල වලින් ඒවා වාසිදායක ලෙස වෙන්කර හඳුනා ගනී.
සෛල සංස්කෘතියේ වෛරස් ප්‍රචාරණය (ප්රජනනය) මතසයිටොපතික් ආචරණය (CPE) මගින් විනිශ්චය කරනු ලබන අතර එය අන්වීක්ෂීයව හඳුනාගත හැකි අතර සෛලවල රූප විද්‍යාත්මක වෙනස්කම් මගින් සංලක්ෂිත වේ.
වෛරස් වල CPD වල ස්වභාවය, ඒවායේ හඳුනාගැනීම (ඇඟවීම) සහ තාවකාලික හඳුනාගැනීම සඳහා, එනම්, ඔවුන්ගේ විශේෂ නිර්ණය කිරීම සඳහා භාවිතා වේ.
ක්රම වලින් එකක්වෛරස් පිළිබඳ ඇඟවීම පදනම් වී ඇත්තේ ඒවා ප්රජනනය කරන සෛල මතුපිට රතු රුධිර සෛල අවශෝෂණය කිරීමට ඇති හැකියාව මත ය - hemadsorption ප්රතික්රියාව. වෛරස් ආසාදිත සෛල සංස්කෘතියක එය ස්ථානගත කිරීම සඳහා, එරිත්රෝසයිට් අත්හිටුවීමක් එකතු කරනු ලබන අතර, යම් කාලයක් සම්බන්ධ වීමෙන් පසුව සෛල සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ් සමස්ථානික ද්රාවණයකින් සෝදා හරිනු ලැබේ. ඇලෙන රතු රුධිර සෛල වෛරස් ආසාදිත සෛල මතුපිට පවතී.
තවත් ක්රමයක් වන්නේ hemagglutination ප්රතික්රියාව (HR) වේ.එය සෛල සංස්කෘතියක සංස්කෘතික තරලයේ හෝ කුකුල් කලලයක chorioallantoic හෝ amniotic තරලයේ වෛරස් හඳුනා ගැනීමට භාවිතා කරයි.
වෛරස් අංශු ගණන සෛල සංස්කෘතියේ CPD මගින් අනුකරණය කිරීම මගින් තීරණය වේ. මෙය සිදු කිරීම සඳහා, සංස්කෘතික සෛල වෛරස් දස ගුණයකින් තනුක කිරීමකින් ආසාදනය වේ. ඉන්කියුබේෂන් දින 6-7 පසු, ඔවුන් CPE පැමිණීම සඳහා පරීක්ෂා කරනු ලැබේ. වෛරස් ටයිටරය ආසාදිත සංස්කෘතීන්ගෙන් 50% ක් තුළ CPE ඇති කරන ඉහළම තනුක කිරීම ලෙස සැලකේ. වෛරස් ටයිටරය සයිටොපති මාත්රා ගණනින් ප්‍රකාශ වේ.
තනි වෛරස් අංශු ගණනය කිරීම සඳහා වඩාත් නිවැරදි ප්රමාණාත්මක ක්රමයක් වන්නේ සමරු ඵලකය ක්රමයයි.
සමහර වෛරස් හඳුනාගෙන ඇතුළත් කිරීම් මගින් හඳුනාගත හැකිය, ඒවා ආසාදිත සෛලවල න්‍යෂ්ටිය හෝ සයිටොප්ලාස්මයේ සාදයි.
කුකුල් මස් කළල.සෛල සංස්කෘතීන් හා සසඳන විට කුකුල් මස් කළල වෛරස් හා මයිකොප්ලාස්මා වලින් දූෂිත වීමට ඇති ඉඩකඩ බෙහෙවින් අඩු වන අතර විවිධ බලපෑම් වලට සාපේක්ෂව ඉහළ ශක්‍යතාවක් සහ ප්‍රතිරෝධයක් ඇත.
රෝග විනිශ්චය අරමුණු සඳහා rickettsia, chlamydia සහ වෛරස් ගණනාවක පිරිසිදු සංස්කෘතීන් ලබා ගැනීම සඳහා මෙන්ම විවිධ සූදානම (එන්නත්, රෝග විනිශ්චය) සකස් කිරීම සඳහා දින 8-12 ක් වයසැති කුකුල් මස් කළල භාවිතා කරනු ලැබේ. සඳහන් කළ ක්ෂුද්ර ජීවීන්ගේ ප්රජනනය විනිශ්චය කරනු ලබන්නේ කලලරූපය විවෘත කිරීමෙන් පසු එහි පටලවල ඇති රූප විද්‍යාත්මක වෙනස්කම් මගිනි.
ඉන්ෆ්ලුවෙන්සා සහ වසූරිය වැනි සමහර වෛරස් වල ප්රතිනිෂ්පාදනය කුකුල් මස් හෝ වෙනත් රතු රුධිරාණු සමඟ හේමාග්ලුටිනේෂන් ප්රතික්රියාව (HRA) මගින් විනිශ්චය කළ හැකිය.
මෙම ක්රමයේ අවාසි අතර කලලරූපය විවෘත නොකර අධ්‍යයනයට ලක්ව ඇති ක්ෂුද්ර ජීවීන් හඳුනා ගැනීමේ නොහැකියාව මෙන්ම විවිධ ප්‍රෝටීන් සහ විවිධ සංයෝග නිෂ්පාදනය කිරීමේදී රිකට්සියා හෝ වෛරස් පසුව පිරිපහදු කිරීම සංකීර්ණ කරන වෙනත් සංයෝග විශාල ප්‍රමාණයක් එහි තිබීම ඇතුළත් වේ. සූදානම් කිරීම්.
රසායනාගාර සතුන්.විශේෂිත වෛරසයකට සතුන්ගේ විශේෂ සංවේදීතාව සහ ඔවුන්ගේ වයස වෛරස් වල ප්‍රජනන හැකියාව තීරණය කරයි. බොහෝ අවස්ථාවලදී, අලුත උපන් සතුන් පමණක් විශේෂිත වෛරසයකට සංවේදී වේ (උදාහරණයක් ලෙස, Coxsackie වෛරස් වලට කිරි උරා බොන මීයන්).
අනෙක් අයට වඩා මෙම ක්රමයේ වාසිය වන්නේ සංස්කෘතිය හෝ කලලරූපය තුළ දුර්වල ලෙස ප්රජනනය කරන එම වෛරස් හුදකලා කිරීමේ හැකියාවයි. එහි අවාසි අතර විදේශීය වෛරස් හා මයිකොප්ලාස්මා සමඟ පර්යේෂණාත්මක සතුන්ගේ ශරීරය දූෂණය වීම මෙන්ම පර්යේෂණ කාලය දිගු කරන මෙම වෛරසයේ පිරිසිදු රේඛාවක් ලබා ගැනීම සඳහා සෛල සංස්කෘතියක පසුව ආසාදනය වීමේ අවශ්‍යතාවය ඇතුළත් වේ.
හැදින්වීම
වෛරස් ප්රමාණාත්මක සමුච්චය කිරීම සඳහා, සෛල සංස්කෘතීන් වඩාත් පහසු පද්ධතියකි. ශරීරයෙන් පිටත සත්ව සෛල වගා කිරීමේ පළමු උත්සාහයන් පසුගිය ශතවර්ෂයේ අවසානය දක්වා දිව යයි. මෙම ඛණ්ඩනීය නිරීක්ෂණ මගින් කෘතිම තත්ව යටතේ පටක සහ සෛලවල ශක්යතාව පවත්වා ගැනීමේ හැකියාව පෙන්නුම් කළ අතර පටක සංස්කෘතීන් පිළිබඳ ගැඹුරු විද්‍යාත්මක පර්යේෂණ සඳහා පදනම දැමීය.
පටක වගා කිරීමේ ක්රම දියුණු කිරීමේ වැඩි ගෞරවය Carrel සතු වේ.කෘත්‍රිම තත්වයන් යටතේ සත්ව සෛල ප්රතිනිෂ්පාදනය කිරීමේ හැකියාව ප්‍රථමයෙන් ඔප්පු කළ පුද්ගලයා ඔහු වන අතර එමගින් ඔවුන්ගේ "අමරණීයත්වය" සහ ඒක සෛලික නිදහස් ජීවින්ට සමාන බව පෙන්නුම් කළේය. අර්ල්ගේ නායකත්වයෙන් යුත් පර්යේෂකයන් කණ්ඩායමක් මෙම දිශාවට සැලකිය යුතු සාර්ථකත්වයක් අත්කර ගත්හ. වීදුරු මත සහ කලවම් කළ දියර අත්හිටුවීමකින් සෛල විශාල සංඛ්යාවක වර්ධනයක් ලබා ගත් පළමු ඒවා විය. ප්රතිජීවක ඖෂධවල පැමිණීම සහ කෘත්‍රිම සංස්කෘතික මාධ්ය නිර්මාණයේ දියුණුව නිසා පටක රෝපණ ශිල්පීය ක්රම දියුණු කිරීමේ නව යුගයක් උදා විය.
ජීව විද්‍යාවේ සහ වෛද්‍ය විද්‍යාවේ විවිධ ගැටළු විසඳීම සඳහා පටක සංස්කෘතීන් දිගු කලක් තිස්සේ භාවිතා කර ඇත. කෙසේ වෙතත්, පටක සංස්කෘතීන්ගේ උපකාරයෙන් ලබා ගත් වෛරස් විද්‍යා ක්ෂේත්‍රයේ දියුණුව පමණක් නවීන මට්ටමට ඔවුන්ගේ සංවර්ධනය සඳහා ප්‍රබල උත්තේජනයක් විය.
වෛරස් වගා කිරීම වෛරස්-සෛල අන්තර්ක්‍රියාකාරිත්වයේ ලක්ෂණ අධ්යයනය කිරීම හා සම්බන්ධ න්‍යායාත්මක ගැටළු ගණනාවක් විසඳීමට උපකාරී වේ. මීට අමතරව, වෛරස් ආසාදන වැලැක්වීම සඳහා ඖෂධ හඳුනා ගැනීම සහ නිෂ්පාදනය කිරීම සම්බන්ධ ව්යවහාරික ගැටළු ගණනාවක් විසඳීම වෛරස් අඩංගු අමුද්රව්ය එකතු කිරීමකින් තොරව කළ නොහැකිය.
1. සෛල සංස්කෘතීන් වර්ග.
සමස්ත ජීවියෙකුගේ සෛල vitro තුළ ජීවන තත්වයන්ට මාරු කිරීම ඔවුන් කලින් කොටසක් වූ පටක හෝ ඉන්ද්‍රියයේ බොහෝ ව්‍යුහාත්මක මූලද්‍රව්‍ය වලින් එකක් ලෙස ඒවායේ පැවැත්ම නතර කරයි. මෙම අවස්ථාවෙහිදී, සෛල neurohumoral සාධක පාලනයෙන් මිදී මෙම පටක වලින් සෛල ප්‍රතික්ෂේප කිරීමේ සත්‍යය සහ vitro හි ඒවායේ පැවැත්මේ නිශ්චිත කොන්දේසි මත රඳා පවතින ලක්ෂණ ගණනාවක් ලබා ගනී.
ශරීරයෙන් පිටත ජීවත්වන සෛල හෝ පටක සංලක්ෂිත වන්නේ පරිවෘත්තීය, රූප විද්‍යාත්මක සහ ජානමය ලක්ෂණ වල සමස්ත සංකීර්ණයකින් වන අතර ඒවා vivo තුළ ඇති අවයව හා පටක වල සෛලවල ගුණාංගවලට වඩා තියුනු ලෙස වෙනස් වේ.
ප්රාථමික පටක පැහැදිලි කිරීමේ ක්රමය සහ එහි වගාවේ තාක්ෂණය අනුව, නොනැසී පවතින සහ වර්ධනය වන පටක සහ සෛල සංස්කෘතීන් වර්ග කිහිපයක් වෙන්කර හඳුනාගත හැකිය. වැඩෙන සෛලවල තනි ස්ථර සහ අත්හිටුවීමේ සංස්කෘතීන් බහුලව දක්නට ලැබේ. ඒවා නවීන රසායනාගාර සහ කාර්මික වෛරස් භාවිතයේ පදනම වේ.
තනි ස්ථර සෛල සංස්කෘතීන්හි ප්‍රධාන වර්ග දෙකක් තිබේ: ප්රාථමික සහ අඛණ්ඩ.
"ප්රාථමික" යන යෙදුමෙන් අදහස් කරන්නේ කලල හෝ පශ්චාත් ප්‍රසව කාලය තුළ මිනිස් හෝ සත්ව පටක වලින් සෘජුවම ලබාගත් සෛල සංස්කෘතියකි. එවැනි භෝග වල ආයු කාලය සීමිතය. නිශ්චිත කාලයකට පසු, ඒවා තුළ නිශ්චිත නොවන පරිහානියේ සංසිද්ධි සිදු වන අතර, එය සයිටොප්ලාස්මයේ කැට සහ රික්තකරණය, සෛල වටකුරු කිරීම, සෛල අතර සම්බන්ධතාවය නැතිවීම සහ ඒවා වගා කරන ලද ඝන උපස්ථරය තුළ ප්‍රකාශ වේ. මාධ්යයේ කාලානුරූප වෙනස්වීම්, පසුකාලීන සංයුතියේ වෙනස්වීම් සහ අනෙකුත් ක්‍රියා පටිපාටි ප්රාථමික සෛල සංස්කෘතියේ ආයු කාලය තරමක් වැඩි කළ හැකි නමුත් එහි අවසාන විනාශය හා මරණය වැළැක්විය නොහැක. බොහෝ දුරට, මෙම ක්රියාවලිය සමස්ත ජීවියා තුළ ක්රියාත්මක වන neurohumoral සාධක පාලනයෙන් ඉවත් කරන ලද සෛලවල පරිවෘත්තීය ක්රියාකාරිත්වයේ ස්වභාවික වඳ වී යාම සමඟ සම්බන්ධ වේ.
සෛල ස්ථරයේ බොහෝ පරිහානියේ පසුබිමට එරෙහිව ජනගහනයේ තනි සෛල හෝ සෛල කණ්ඩායම් පමණක් වර්ධනය වීමට සහ ප්රජනනය කිරීමට හැකියාව රඳවා ගත හැකිය. මෙම සෛල, නැවත නැවත බද්ධ කිරීමත් සමඟ, vitro හි නිමක් නැති ප්රජනනය සඳහා විභවය සොයා ගැනීමෙන් අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන් ඇති කරයි.
බද්ධ කරන ලද සෛලවල රේඛා සහ වික්රියා ඇත. පළමු පදය මගින් බද්ධ කළ හැකි සෛල, විභව අමරණීය භාවය සහ රීතියක් ලෙස, විෂමාංශික karyotype මගින් සංලක්ෂිත වේ; දෙවන පදය මගින් අර්ධ බද්ධ කළ හැකි සෛල ද්විත්ව වර්ණදේහ කට්ටලයක් සහ vitro හි සීමිත ආයු කාලයක් දක්වයි. සෛල දෙකෙහිම පෙනුම ප්රාථමික සංස්කෘතීන්ගේ සෛල ජනගහනය තුළ තෝරා ගැනීමේ ක්රියාවලිය සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති අතර එමඟින් බද්ධ කරන ලද සෛලවල සියලුම රේඛා සහ වික්රියා වල මූලාශ්රය වේ.
ඕනෑම ප්රාථමික සංස්කෘතියකට සාපේක්ෂව බද්ධ කරන ලද සෛල රේඛා වල ප්‍රධාන වාසිය වන්නේ ශරීරයෙන් පිටත අසීමිත ප්රජනනය සඳහා ඇති හැකියාව සහ සාපේක්ෂ ස්වාධිපත්‍යය, ඒවා බැක්ටීරියා සහ තනි සෛල ප්‍රොටොසෝවා වෙත සමීප කරයි.
බද්ධ කළ හැකි සෛල තුළ නිමක් නැතිව ප්රජනනය කිරීමට ඇති හැකියාව ගුණාත්මක පිම්මක් සනිටුහන් කරයි, එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස සෛල කෘතිම පෝෂක මාධ්ය මත වැඩෙන ක්ෂුද්ර ජීවීන් මෙන් ස්වයංක්‍රීයව පැවතීමේ හැකියාව ලබා ගනී. සෛල තුළ එවැනි ලක්ෂණ පෙනුමට තුඩු දෙන වෙනස්කම් මාලාව පරිවර්තනය ලෙස හැඳින්වේ, අඛණ්ඩ පටක සංස්කෘතීන්ගේ සෛල පරිවර්තනය ලෙස හැඳින්වේ.
සෛල සංස්කෘතික ශිල්පීය ක්‍රමවල වැඩිදියුණු කිරීම් මගින් විවිධ සත්ව හා මිනිස් පටක වලින් අඛණ්ඩ සෛල රේඛා ලබා ගැනීමේ හැකියාව සැලකිය යුතු ලෙස පුළුල් කර ඇත. ඒ අතරම, පටක වල අසීමිත වර්ධනයට අනුවර්තනය වීමේ හැකියාව අහිමි වන වයස් සීමාවක් සොයා නොගන්නා ලදී, i.e. පරිවර්තනය කිරීමට.
බද්ධ කළ හැකි සෛල රේඛා වල තවත් ප්‍රභවයක් වන්නේ මාරාන්තික නියෝප්ලාස්ම් ය. මෙම අවස්ථාවේ දී, ව්යාධි ක්රියාවලියක වර්ධනයේ ප්රතිඵලයක් ලෙස vivo තුළ සෛල පරිවර්තනය සිදු වේ, එහි හේතු විද්යාව බොහෝ දුරට අපැහැදිලි වේ.
සියලුම මාරාන්තික නියෝප්ලාස්ම අඛණ්ඩ සෛල සංස්කෘතීන් ඇති කිරීමට සමත් නොවේ. නිදසුනක් වශයෙන්, මිනිස් ආමාශයේ සහ පියයුරු පිළිකාවලින් බද්ධ කළ හැකි සෛල ලබා ගැනීමට ගත් උත්සාහයන් අසාර්ථක විය. සමේ හා ශ්ලේෂ්මල පටලවල ඇති squamous cell carcinoma සෛල ජීවයට අනුවර්තනය කිරීම අපහසුය. අනෙක් අතට, රේඛා සාපේක්ෂව පහසුවෙන් සාර්කෝමා පටක වලින් සහ ස්නායු පද්ධතියේ මාරාන්තික පිළිකා වලින් ලබා ගනී.