Ensayo de hemaglutinación de treponema pallidum (tpha) de reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA). PHA o reacción de hemaglutinación pasiva, ¿qué tipo de análisis de sangre es? Resultados falsos positivos de pruebas no treponémicas.

Quizás le hayan remitido a un laboratorio para realizar un análisis de RPGA, pero no comprende realmente lo que significa esta abreviatura. Qué es y qué tan grave es, lo aprenderá en detalle en este artículo.

Además de los pacientes con síntomas graves de enfermedades de transmisión sexual, se puede derivar para un análisis RPGA a las personas que se someten a un examen médico con el fin de conseguir un trabajo, antes de someterse a una cirugía o cuando una mujer se registra para quedar embarazada. No hay nada aterrador o vergonzoso aquí, simplemente los especialistas analizan a la población en busca de enfermedades sexuales graves, lo que permite identificar rápidamente a los portadores de la infección y brindarles la atención médica adecuada incluso antes de que se desarrollen complicaciones.

Si practica relaciones sexuales sin protección (independientemente de lo bien que conozca a su pareja sexual, porque muchas personas no son conscientes de su infección), o sospecha de su pareja habitual, puede donar sangre de forma segura y pronto conocerá el resultado y disipará el miedo a desconocido. Para obtener una derivación para análisis de laboratorio, no es necesario acudir a un venereólogo. Basta con contactar a su terapeuta con esta solicitud, o comentarle sus inquietudes a su ginecólogo o urólogo.

Transcripción del análisis

RPHA significa reacción de hemaglutinación pasiva. Es necesario conocer su significado al determinar la presencia del agente causante de una enfermedad venérea grave: la sífilis. Si el cuerpo humano ha sucumbido a una infección, esto se puede detectar con precisión mediante los resultados de un análisis de sangre.

Durante el estudio, un especialista puede detectar aglutinación de glóbulos rojos, lo que significa que los glóbulos rojos han comenzado a pegarse y precipitarse bajo alguna influencia negativa. En este caso, se trata de treponema pallidum, que vive en las capas superiores y provoca sífilis en el cuerpo.

El mecanismo de infección es bastante sencillo:

1. Hay un cuerpo sano;
2. En él entra un microorganismo patógeno, Treponema pallidum;
3. Se desarrolla una respuesta inmune;
4. Esto, a su vez, provoca la producción de anticuerpos, que son un signo de una enfermedad de transmisión sexual existente.

Un análisis de sangre para RPHA se caracteriza por dos tipos de anticuerpos que indican la presencia o ausencia del agente causante de la sífilis:

• Inespecífico y no treponémico;
• Específico y treponémico.

Esta técnica de investigación se utilizó por primera vez en 1965. Desde entonces, se ha utilizado activamente para diagnosticar la sífilis. Su alta sensibilidad permite no solo detectar el patógeno, sino también determinar la etapa en la que ocurre la enfermedad.

Hay cuatro formas conocidas de sífilis:

1. Primario;
2. Secundario;
3. Terciario;
4. Latente.

Con el desarrollo de patologías autoinmunes, en el contexto de algunas enfermedades virales, la cantidad de anticuerpos inespecíficos en el cuerpo del paciente puede aumentar, lo que el análisis RPGA percibirá como una reacción falsa.

El análisis de sangre RPGA está indicado para todos los pacientes que han tenido quejas similares a los signos de sífilis, o cuando el médico sospecha algo similar debido a su amplia experiencia práctica.

También es muy importante que algunas representantes femeninas que planean quedar embarazadas pronto se sometan a un examen similar. Porque en su caso necesitan someterse a un tratamiento y luego sólo piensan en tener un hijo, si, por supuesto, su salud es importante para ellos.

Este análisis suele incluirse en el grupo de pruebas obligatorias antes de la cirugía. Gracias a un diagnóstico completo del organismo, es posible planificar el curso de la operación y su resultado favorable.

Cómo realizar esta prueba

Probablemente comprenda la gravedad que se puede realizar en un diagnóstico basándose en los resultados del análisis RPGA.

En ocasiones la conclusión es errónea debido a la mala preparación del paciente para el estudio, por lo que una respuesta falsa positiva se convierte en motivo para prescribir un tratamiento inútil o, por el contrario, nocivo.

Para evitar distorsiones en los resultados de las pruebas, basta con seguir las siguientes recomendaciones:

• No debe ingerir ningún alimento la víspera de donar sangre para RPGA. Este análisis, como la mayoría de los demás, se realiza estrictamente con el estómago vacío;
• Cualquier otra bebida que no sea agua limpia tampoco debe ingresar al cuerpo el día asignado para el análisis. Si bebe líquido permitido, su volumen debe ser mínimo para que no afecte la composición de la sangre;
• Por lo general, para que una persona no pase hambre ni sed, se extrae sangre por la mañana;
• Es mejor no fumar nada esta mañana. Las sustancias contenidas en el humo y los vapores pueden dar una reacción negativa, por lo que el asistente de laboratorio interpretará incorrectamente los resultados;
• La prohibición también se aplica al alcohol. Además, es mejor dejar de beber alcohol unos días antes de la prueba.

Al llegar a una habitación especial, el paciente debe quitarse la ropa del brazo para que la enfermera pueda extraer sangre de una vena. Este procedimiento es conocido por casi todo el mundo. Es relativamente indoloro y rápido. Al final del mismo, se le indicará cuando los resultados del análisis RPGA estén listos para poder recopilarlos.

La sífilis es una enfermedad infecciosa causada por la espiroqueta Treponema pallidum, con tendencia a un curso crónico progresivo, con una clara periodización de los síntomas clínicos.

El predominio de la transmisión sexual sobre la transmisión por contacto y transplacentaria sitúa a esta enfermedad entre las enfermedades de transmisión sexual (ETS, ITS). Además de estos métodos de transmisión de la infección, la ruta artificial (del latín "artificio" - creada artificialmente) desempeña un papel especial.

Es típico de las instituciones médicas, principalmente implementadas en un entorno hospitalario. La infección ocurre durante transfusiones de sangre, diversas operaciones quirúrgicas y métodos de diagnóstico invasivos.

A pesar de la cuarentena de la sangre donada, el problema de identificar la sífilis en donantes en diferentes etapas de la enfermedad sigue siendo relevante.

Por lo tanto, las medidas de diagnóstico de la sífilis requieren estandarización, la introducción de nuevos métodos de identificación sensibles e informativos, así como minimizar los errores y la interpretación incorrecta de los resultados de las pruebas.

Mostrar todo

1. Clasificación de los métodos de diagnóstico de laboratorio.

El diagnóstico de sífilis tiene algunas características y se diferencia del diagnóstico de otras infecciones bacterianas. La estructura compleja y las propiedades antigénicas de Treponema pallidum provocan errores en la interpretación de los resultados de las reacciones serológicas.

Hay 3 grupos principales de pacientes a los que se les ofrece un análisis de sangre para detectar sífilis:

1. 1 Detección y examen médico de grupos de población (incluido el embarazo, registro en la clínica prenatal, empleo y registro de un historial médico, etc.).
2. 2 Detección en grupos de riesgo (relaciones sexuales sin protección con una persona infectada con sífilis, personas después de un contacto sexual forzado, personas infectadas por el VIH, etc.).
3. 3 Personas con síntomas de la enfermedad o personas sospechosas de tener una infección sifilítica.

Todos los métodos de laboratorio se dividen convencionalmente en directos e indirectos.

1.1.

1. Métodos directos
2. 1 Identificación de Treponema pallidum en campo oscuro (microscopía de campo oscuro).
3. 3 PCR (reacción en cadena de la polimerasa).
4. 4 Sonda de ADN o hibridación de ácido nucleico.

1.2.

Métodos indirectos

1. Las reacciones serológicas son métodos de diagnóstico de laboratorio basados ​​​​en la detección de anticuerpos (abreviado AT) contra antígenos de Treponema pallidum (abreviado AG). Son de primordial importancia para confirmar el diagnóstico.
   • 1 Pruebas no treponémicas:
   • reacción de Wasserman (WRS);
   • Reacción de microprecipitación (MR, RMP) y sus análogos, que se detallan a continuación;
   • Prueba rápida de reagina plasmática (RPR, RPR);
   • Prueba de suero de toluidina roja (CONFIANZA);
2. Prueba no treponémica del Laboratorio de Investigación de Enfermedades Venéreas - VDRL.
   • 2 pruebas treponémicas:
   • Método de inmovilización de Treponema pallidum – RIBT/RIT;
   • Solución de inmunofluorescencia - RIF, FTA (diluciones de suero RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-ción de hemaglutinación pasiva (RPGA, TRPGA, TPHA);
   • Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA, EIA);



Inmunotransferencia.

Figura 1 - Algoritmo de serodiagnóstico de sífilis

1.3.

Métodos histomorfológicos

Estos métodos se reducen a identificar las características de la histomorfología de las manifestaciones sifilíticas. Se presta atención a las sutilezas de la estructura del chancro. Sin embargo, el diagnóstico diferencial de la infección mediante histología es muy difícil. La histomorfología se utiliza con otras pruebas clínicas y de laboratorio.

2. Microscopía de campo oscuro de Treponema pallidum

Este método se basa en la detección directa de treponema pallidum en el material de prueba utilizando un microscopio y dispositivos especiales (con mayor frecuencia secreción de erosiones y úlceras, con menos frecuencia líquido cefalorraquídeo y otros sustratos).

Mediante escarificación, raspado, compresión, se obtiene exudado de erosiones y defectos ulcerativos, luego la preparación preparada se examina bajo un microscopio.

Por lo general, el treponema pallidum se detecta en una preparación obtenida de chancro, de focos de sífilis secundaria recurrente, fresca y secundaria, así como en punteados de ganglios linfáticos y placenta.

Se deja caer aceite de inmersión sobre el cubreobjetos. Girando el tubo y girando la lupa se ajusta la iluminación deseada.

En el campo oscuro del microscopio se detectan células sanguíneas, células epiteliales y el agente causante de la sífilis. Treponema pallidum parece una espiral, muy delgada, que emite un color plateado, con movimientos suaves.



Figura 2 - Microscopía de campo oscuro como forma de visualizar Treponema pallidum en el material en estudio. Fuente de la ilustración: CDC

Treponema pallidum debe distinguirse de otros treponemas, incluido Tr. refringens, que se puede encontrar en la orofaringe y en la membrana mucosa de los órganos genitales. Esta bacteria hace movimientos caóticos, tiene rizos anchos y asimétricos, bastante ásperos. Además, Treponema pallidum se distingue de Tr. Microdentio, Tr. Buccalis y Tr. vicente.

La visualización de bacterias en un campo oscuro a veces se complementa con una reacción de fluorescencia. Para ello, se añaden al material nativo anticuerpos antitreponémicos marcados con un tinte fluorescente. En este caso se forma un complejo denominado antígeno-anticuerpo (abreviado AG-AT), que es objeto de estudio mediante microscopio de fluorescencia.

3. Método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

La PCR, desarrollada en 1991 para detectar la molécula de ácido desoxirribonucleico (ADN) de Treponema pallidum, es muy sensible y específica, lo que permite la detección de fragmentos de ADN del patógeno.

Este análisis se basa en copiar secciones cortas de ADN de la espiroqueta pálida, que cumple los parámetros especificados y está presente en la muestra. Todo esto se realiza en condiciones artificiales (in vitro). La reacción se lleva a cabo en un dispositivo: un termociclador, que proporciona la periodización de los ciclos de temperatura. El enfriamiento se produce seguido del calentamiento de los tubos de ensayo con un error de 0,1˚C.

La plantilla de ADN se calienta durante 2 minutos a una temperatura de 92-98˚C (la temperatura máxima se usa si la polimerasa es termoestable). Cuando se calientan, las hebras de ADN se separan debido a la ruptura de los enlaces de hidrógeno entre ellas. En la etapa de recocido, la temperatura de reacción se reduce para unir el cebador a la plantilla monocatenaria.

El recocido dura unos 30 segundos, tiempo durante el cual se sintetizan cientos de nucleótidos. Las moléculas recién sintetizadas son copiadas por la polimerasa, como resultado de lo cual se multiplican fragmentos específicos de ácido desoxirribonucleico. La detección posterior de fragmentos se realiza mediante electroforesis en gel de agar.

El diagnóstico de sífilis por PCR todavía es de naturaleza experimental, pero se justifica cuando se detecta una infección congénita, en casos de diagnóstico complejos o cuando el contenido de Treponema pallidum en el material de prueba es mínimo.

4. hibridación de ADN

La hibridación del ADN se realiza in vitro y se basa en la unión total o parcial de dos moléculas de ADN monocatenario en una sola molécula. En el caso de una correspondencia completa de fragmentos complementarios, la fusión se produce fácilmente. Si la coincidencia complementaria es parcial, la unión de las cadenas de ADN se produce lentamente. En función del momento de la fusión de la cadena, se puede evaluar el grado de complementariedad.

Cuando el ADN se calienta en una solución tampón, las bases nitrogenadas que son complementarias rompen los enlaces de hidrógeno, lo que hace que las cadenas de ADN diverjan. A continuación, se obtiene un fármaco a partir de dos ácidos desoxirribonucleicos desnaturalizados. Cuando se enfrían, las regiones monocatenarias se renaturalizan. Se forma el llamado híbrido de ADN.

El método permite estimar y analizar la tasa de hibridación, teniendo en cuenta las características (similitudes y diferencias) del ADN entre especies o dentro de una especie.

El uso de una sonda de ADN implica la hibridación de un fragmento de ADN marcado con una región de ADN específica para identificar secuencias de nucleótidos complementarias. Para marcar la sonda se utiliza un grupo de átomos insaturados (cromóforos) o isótopos radiactivos.

La sonda de ADN se utiliza para la detección heterogénea y homogénea de ácidos nucleicos. La función de la sonda es identificar áreas donde se ha producido la fusión objetivo-sonda. La detección en un sistema homogéneo tiene la ventaja de permitir controlar la hibridación de las moléculas de ADN en tiempo real.

La esencia del método es la desnaturalización y renaturalización del ADN (reunificación de cadenas de ADN). El proceso de renaturalización del ácido nucleico y la sonda de ADN finaliza con la formación de un “híbrido”.

Secuencias de ácido nucleico específicas se hibridan con la sonda de ADN y, por tanto, se detectan y permiten estimar la cantidad de ADN en el material en estudio.

5. Infección de animales de laboratorio.

La alta sensibilidad de los conejos al Treponema pallidum (alrededor del 99,9%) permite su uso en el diagnóstico de la infección sifilítica.

La infección de conejos se lleva a cabo en centros de investigación y es el "estándar de oro" para evaluar la sensibilidad de otros métodos.

Volvamos a las pruebas treponémicas y no treponémicas, ya que se utilizan con mayor frecuencia. Consideremos sus ventajas y desventajas, así como los errores en la interpretación de los resultados.

6. Pruebas no treponémicas

Se trata de pruebas para determinar los anticuerpos IgG e IgM contra un antígeno de cardiolipina estandarizado. Su importante inconveniente es su especificidad relativamente baja.

El bajo costo y la facilidad de implementación permiten clasificar estas pruebas como pruebas diagnósticas necesarias para establecer un diagnóstico preliminar y un cribado entre la población.

Se trata de pruebas no treponémicas que se realizan al solicitar un registro médico, solicitar un trabajo o registrarse en una clínica prenatal.

Defectos:

1. 1 Sensibilidad mínima en la etapa de sífilis primaria – 70%;
2. 2 Sensibilidad mínima en la etapa de sífilis tardía – 30%;
3. 3 Posibilidad de resultados falsos negativos y falsos positivos;
4. 4 Intensidad laboral de realizar RSK.

Ventajas:

1. 1 Costo relativamente bajo de producción de pruebas;
2. 2 Reciba una respuesta rápida;
3. 3 Posibilidad de su uso para cribado.

Es posible obtener muestras falsamente positivas o débilmente positivas en los siguientes casos:

1. 1 Violación de la tecnología de ejecución al bloquear el complejo AG-AT.
2. 2 El paciente padece enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide, reumatismo, esclerodermia, lupus eritematoso sistémico, sarcoidosis, etc.).
3. 3 Neoplasias malignas.
4. 4 Infecciones virales y bacterianas.
5. 5 Enfermedades endocrinas (tiroiditis autoinmune, diabetes mellitus).
6. 6 Embarazo.
7. 7 Beber alcohol.
8. 8 Comer alimentos grasos.
9. 9 Edad senil.

Como puede ver en la lista, existen muchas razones para un resultado incorrecto. Por tanto, hay que tener mucho cuidado con ello. Consideremos dos muestras más junto con RSC. Esta es una reacción de microprecipitación y VDLR (su modificación).

7. Reacción de fijación del complemento (RSK, Wasserman, RW)

Esta es una prueba basada en la capacidad del complemento para unirse a complejos AG-AT. El complejo formado se identifica mediante el sistema hemolítico. El antígeno de cardiolipina aumenta significativamente la sensibilidad de la prueba.

También es sensible la reacción de Kolmer, que consiste en realizarla en diferentes condiciones de temperatura. Así, la primera fase de la reacción de Kolmer transcurre a una temperatura de 20 ˚C durante media hora, la segunda fase a una temperatura de 4-8 ˚C durante 20 horas. Durante este tiempo se produce la fijación del complemento.

Al realizar RSC, es posible obtener resultados dramáticamente positivos. Probablemente la razón sea un título alto de anticuerpos en suero sin diluir. En este caso, las muestras se administran con dosis decrecientes.

Para diferenciar las etapas de la sífilis y evaluar la eficacia del tratamiento antisifilítico, se determina la cantidad de AT en el suero.

La positividad de la muestra se evalúa mediante cruces, y la dilución del suero también se indica en las reacciones de Wasserman, Kolmer y Kann.

8. Reacción de microprecipitación

Dado que la complejidad de realizar las pruebas anteriores es alta, se ha desarrollado un método acelerado para el serodiagnóstico de la sífilis, el llamado método rápido - reacción de microprecipitación (abreviado como MR, RMP), para cubrir la amplitud del examen clínico de diferentes grupos. de la población.

Se realiza con antígeno de cardiolipina y sustancias auxiliares. Su ventaja es la recolección de sangre periférica para investigación. Esto acelera significativamente tanto la técnica en sí como el trabajo de los técnicos de laboratorio.



Figura 2 - Reacción de microprecipitación (esquema)

Para realizar la RM se requiere plasma o suero inactivado de la sangre del paciente (contienen anticuerpos). A continuación, el plasma se coloca en pocillos marcados. Luego, se añade una gota de antígeno de cardiolipina al material de prueba, se mezcla y se agita. Como resultado, aparecen escamas características en el suero de la persona infectada, que varían en intensidad.

Esta es una muestra de calidad. Para la evaluación cuantitativa se utilizan 10 diluciones de suero, colocadas en 10 pocillos con el etiquetado adecuado. Con la RM cualitativa, la respuesta se indica en forma de cruces (más) o menos; con la RM cuantitativa, se indica el título de anticuerpos (1:2, 1:4, etc.).

La presencia de escamas se considera una respuesta positiva o débilmente positiva. La aparición de floculados es posible incluso en ausencia de enfermedad, por lo que la valoración final del resultado obtenido se realiza tras un estudio de control u otras reacciones (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

9. VDRL

El método recomendado por la Organización Mundial de la Salud para probar una reacción con un antígeno lipoide (AG) se considera, con razón, el mejor entre otras pruebas estándar no treponémicas. Desarrollado en EE. UU., Georgia, en el laboratorio de enfermedades de transmisión sexual (Venereal Diseases Research Laboratories).

La abreviatura de la institución sirvió como nombre de la muestra: VDRL. VDRL es una modificación de MR. El suero de un paciente con sífilis se inactiva y se coloca en un portaobjetos de vidrio. El antígeno utilizado está formado por cardiolipina, colesterol y lecitina en porcentajes variables. La respuesta se registra casi de inmediato.

Se produce una floculación distinta en presencia de anticuerpos en el suero. El suero se vuelve reactivo después de 4 semanas de infección. Para evaluar la cantidad de anticuerpos, el suero se prediluye exponencialmente.

Ventajas de VDRL:

1. 1 sensibilidad relativamente alta;
2. 2 especificidad relativamente alta;
3. 3 facilidad de implementación;
4. 4 bajo costo de reactivos;
5. 5 obteniendo una respuesta rápida.

Una desventaja del VDRL es su tasa relativamente alta de falsos positivos.

Sus causas son las mismas enfermedades enumeradas anteriormente.

Las pruebas treponémicas se realizan con antígenos específicos de Treponema pallidum. Son necesarios y obligatorios para establecer un diagnóstico final. Se trata de la reacción de inmunofluorescencia (RIF), la reacción de hemaglutinación indirecta (IPHA), el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), etc.

Después de un resultado positivo de una prueba no treponémica (RPR, MP, VDRL), siempre se deben realizar pruebas treponémicas (generalmente una combinación: RPGA, ELISA, RIF).

Las pruebas treponémicas son más complejas de realizar que las pruebas rápidas y requieren más dinero.

10.RIF

Esta reacción (abreviada como RIF) se utiliza para diagnosticar la sífilis, incluidas las formas latentes, y para verificar muestras positivas y falsas positivas.

RIF se basa en el brillo de anticuerpos marcados cuando se combinan con un complejo antígeno-anticuerpo bajo una lámpara de cuarzo. El método comenzó a utilizarse en los años 60 y se distinguió por su facilidad de implementación y alta especificidad (que es ligeramente inferior a RIBT).

Tiene varias modificaciones: RIF-10, RIF-200 y RIF-abs.

RIF es más sensible cuando se diluye 10 veces y el resto son más específicos. El RIF se lleva a cabo en dos fases. El suero sanguíneo del paciente se añade al AG. Se forma un complejo AG-AT, que se estudia en la siguiente fase. A continuación, se identifica mediante microscopía el complejo marcado con fluorocromo. Si no se observa ningún brillo, esto indica la ausencia de anticuerpos específicos en el suero sanguíneo.

RIF-200 es la más valiosa de todas las diluciones. El método está destinado a diagnosticar diversas formas de sífilis, especialmente la sífilis latente y volver a comprobar muestras positivas.

11. COSTILLA

La reacción de inmovilización de Treponema pallidum (abreviada RIBT, RIT) es una de las pruebas serológicas complejas que requiere esfuerzos y costes económicos importantes. La RIBT se utiliza cada vez menos, pero su relevancia sigue siendo en el diagnóstico de la sífilis latente.

Es de gran importancia para reconocer resultados falsos positivos en mujeres embarazadas y se basa en la inmovilización de bacterias en presencia de inmovilisinas, anticuerpos tardíos.

El resultado se evalúa en función del porcentaje (%) de treponemas inmovilizados mediante una tabla especial:

1. 1 De 0 a 20 - prueba negativa.
2. 2 De 21 a 50: prueba débilmente positiva.
3. 3 De 50 a 100 - reacción positiva.

También es posible obtener resultados falsos positivos cuando se utiliza RIBT. Por tanto, es posible una respuesta incorrecta en caso de infección por trepanematasas tropicales, así como en caso de tuberculosis, cirrosis hepática, sarcoidosis y pacientes de edad avanzada.

12. RPGA

Este análisis de sangre para detectar sífilis se llama prueba de hemaglutinación pasiva (abreviado como análisis de sangre para RPHA, THRHA).

El antígeno de RPHA se prepara a partir de glóbulos rojos de oveja recubiertos con fragmentos de Treponema pallidum (obtenidos de conejos infectados (ver Figura 4)). El análisis utiliza sangre venosa (plasma o suero inactivado) del paciente.

Cuando se agrega un antígeno al suero de un paciente con sífilis, se forma un complejo AG-AT, que conduce a la aglutinación de los glóbulos rojos. la aglutinación la determina subjetivamente un técnico de laboratorio.



Figura 3 - Esquema de RPHA (reacción de hemaglutinación pasiva)

La muestra se considera positiva cuando aparecen aglutinados de color rosa uniforme. La tinción roja del precipitado indica precipitación de glóbulos rojos. RPGA es muy sensible y muy específico.

12.1.

Reacción de microhemaglutinación

Es una versión simplificada del RPGA. Se diferencia de la prueba descrita anteriormente en que requiere menos antígeno, diluyente y suero para realizar la reacción. 4 horas después de la incubación del suero, se puede evaluar la muestra. Se utiliza para la detección y exámenes masivos de sífilis.

13. Inmunoensayo enzimático

El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA abreviado) se basa en una reacción antígeno-anticuerpo específica. El material biológico (suero sanguíneo del paciente, líquido cefalorraquídeo) se introduce en pocillos en cuya superficie sólida se fijan los antígenos de treponema pallidum. El material de prueba se incuba y luego se lavan los anticuerpos que no se han unido a los antígenos (consulte la Figura 5).



Figura 4 - Esquema de ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas)

La sensibilidad de ELISA es superior al 95%. El método se utiliza de forma automatizada para estudiar grupos de población electivos: donantes, mujeres embarazadas y otros, para aclarar el diagnóstico de pruebas no treponémicas positivas y falsas positivas.

14. Inmunotransferencia

La inmunotransferencia es un método muy sensible, una modificación del ELISA simple. La reacción se basa en electroforesis con separación de antígenos de Treponema pallidum.

Los inmunodeterminantes separados se transfieren a papel de nitrocelulosa y se revelan en ELISA. A continuación, se incuba el suero y se lavan los anticuerpos no unidos. El material resultante se trata con inmunoglobulinas (IgM o IgG) marcadas con una enzima.

15. Evaluación clínica de los resultados del diagnóstico de laboratorio de sífilis.

En la Tabla 1 a continuación proporcionamos posibles resultados de pruebas y su interpretación. Como puede ver en la tabla, una evaluación exhaustiva de las pruebas es de primordial importancia a la hora de descifrar.



Tabla 1 - Interpretación de los resultados de las reacciones serológicas (análisis de sangre para sífilis). Para ver, haga clic en la tabla

La reactividad de la prueba también se evalúa mediante "cruces":

1. 1 La respuesta máxima (prueba claramente positiva) se indica con 4 cruces.
2. 2 Una prueba positiva se indica con 3 cruces.
3. 3 Una reacción débilmente positiva se indica mediante dos cruces.
4. 4 Una cruz indica un resultado dudoso y negativo.
5. 5 Una respuesta negativa se marca con un signo menos.

El problema de optimizar el diagnóstico de laboratorio de la sífilis no ha perdido su relevancia hasta el día de hoy. Los métodos de diagnóstico modernos, a pesar del deseo de los científicos de llevar el diagnóstico a los niveles más altos posibles de sensibilidad y especificidad, requieren pruebas de control y un enfoque individual.

Una característica de la infección sifilítica es el fenómeno de la serorresistencia, que nunca ha recibido una explicación científica. El diagnóstico se realiza tras un examen completo del paciente mediante métodos epidemiológicos, clínicos y de laboratorio.

En el contexto del desarrollo económico y técnico de la medicina, también se observan avances en el desarrollo de nuevos criterios para el diagnóstico de la sífilis. Todo esto le permitirá tratar a los pacientes de forma rápida, exitosa y precisa.

Hoy en día, se utilizan kits de pruebas estandarizados para realizar RPGA.

Tienen todo lo necesario para el análisis:

• Un frasco con glóbulos rojos que contienen antígenos de Treponema pallidum cepa Nichols en la superficie.
• La misma capacidad, pero con glóbulos rojos “puros” (necesarios para el control).
• Una solución tampón para diluir el suero del paciente (a continuación te contamos por qué se hace esto).
• También se utiliza para el control el suero de una persona que se sabe que tiene sífilis (K+).
• Suero de una persona sana conocida (K–).
• Placa de plástico con pocillos numerados para mezclar muestras y evaluar resultados.

Cada kit de prueba contiene un suministro de reactivos para una determinada cantidad de muestras. Por lo general, 100. Por lo tanto, a veces el suero se almacena hasta que se recolecta la cantidad requerida de muestras para la investigación.

Metodología para el análisis RPGA

La prueba de hemaglutinación pasiva puede proporcionar dos tipos de resultados:

• Cualitativo. Proporciona una respuesta a la pregunta de si la muestra de prueba contiene anticuerpos contra el patógeno.
• Cuantitativo. Le permite evaluar la intensidad de la síntesis de inmunoglobulinas y así rastrear la actividad de la infección.

Normalmente, primero se lleva a cabo una evaluación cualitativa y se seleccionan muestras positivas para estudios cuantitativos.

El algoritmo para la detección sencilla de una infección es el siguiente:

• Se añaden dosis iguales de las muestras de prueba a los pocillos de la placa. Por paciente se asigna una fila de seis orificios.
• En las dos primeras gotas de su plasma, se diluye con tampón 1:20.
• El siguiente par sirve como control; en él se coloca suero K+. Y dos agujeros más para el material K–.
• Luego se añaden glóbulos rojos marcados con antígeno al primer pocillo de cada par. En segundo lugar, los glóbulos rojos están limpios.
• La tableta se agita durante un tiempo para mezclar bien los reactivos y se deja reposar. Mínimo – 45 minutos. Puedes hacerlo toda la noche.

Los resultados se evalúan visualmente. Si la reacción es negativa, los glóbulos rojos se depositan en el fondo de la depresión esférica del agujero.

Esto debería ocurrir tanto en los pocillos que contienen muestras de pacientes como en los que se agregaron glóbulos rojos de control del sistema de prueba puro.

Si el resultado es positivo, los glóbulos rojos no se acumulan en un solo lugar, sino que se distribuyen uniformemente por todo el fondo del pocillo. Se debe observar una imagen similar cuando se mezclan glóbulos rojos marcados con antígeno estándar con una muestra del paciente y suero K+. De esta forma se controla la reacción, lo que evita resultados falsos.

Evaluación cuantitativa de RPGA.

Las muestras positivas se recogen y se diluyen varias veces con una solución tampón (titulada). Antes de cada dilución, se gotea el suero en el pocillo correspondiente de la tableta y se anota encima el grado de dilución total. Luego se agregan a las muestras glóbulos rojos con antígeno de treponema y se determina a qué título aún se observa un resultado positivo. Este es un análisis de sangre cuantitativo para la sífilis RPHA y muestra la concentración de anticuerpos contra el patógeno.

Los resultados se evalúan de la siguiente manera:

• 4+ significa que los glóbulos rojos recubren el fondo del pocillo en una capa uniforme. La aparición de bordes plegados indica altas concentraciones de anticuerpos en la muestra de prueba. La reacción es positiva.
• Se da 3+ si el círculo está despejado, pero algunos de los glóbulos rojos “fluyen” hacia el centro. La imagen parece un paraguas extendido y se considera una reacción positiva.

• 2+ parece un anillo ancho con tendencia a iluminarse en el centro. Débilmente positivo.
• 1+ significa resultado cuestionable. Hay un anillo estrecho en el agujero. Requiere repetición en 1-2 semanas.
• En una prueba negativa, los glóbulos rojos forman un botón en el centro del pocillo.

Sin embargo, hay casos de sífilis serorresistentes, en los que la enfermedad parece haber desaparecido y los anticuerpos persisten durante mucho tiempo. Por lo tanto, RPGA a veces requiere confirmación mediante otros métodos.

Si necesita aprobar la RPGA y someterse a algún examen de sífilis, comuníquese con venereólogos competentes.

El análisis de sangre RPGA es uno de los estudios más importantes que ayuda a determinar la presencia de patógenos patógenos en el cuerpo.

El método RPGA se utiliza muy a menudo en casos de sospecha de sífilis, infección del tracto intestinal, tos ferina y otras patologías peligrosas. Cuando se emite una derivación para un estudio de este tipo, los pacientes están interesados ​​en saber cómo se dona el biomaterial y qué tan fiables son los resultados de la técnica. Esto se discutirá más a fondo.

¿Qué es RPGA y qué características tiene?

No todo el mundo sabe qué es y qué significa la abreviatura RPGA. Esta abreviatura se refiere a la reacción de hemaglutinación pasiva; la técnica es necesaria para determinar el proceso patógeno en el cuerpo.

Esta prueba detecta antígenos de Treponema pallidum (Treponema pallidum), un microorganismo patógeno que causa la sífilis. Si el sujeto está sano y no padece ninguna enfermedad crónica, cuando Treponema pallidum ingresa al cuerpo, el sistema inmunológico comienza a producir anticuerpos activamente.

La presencia de anticuerpos contra Treponema pallidum en el biomaterial en estudio es la base para el diagnóstico de sífilis.

Convencionalmente, las pruebas de sífilis se pueden dividir en 2 tipos:

• específico;
• inespecífico.

La clasificación de la prueba en categorías depende del tipo de anticuerpos encontrados en la muestra de sangre obtenida. A pesar de que este método de diagnóstico se utilizó por primera vez en 1965, las pruebas resultaron ser tan efectivas y eficientes que hoy en día siguen siendo relevantes.

La indudable ventaja del diagnóstico es que permite detectar una infección en cualquier etapa de desarrollo, incluida la etapa latente.

Indicaciones de uso

Los médicos recomiendan realizar una prueba RPGA en los siguientes casos:

• el paciente presenta síntomas clínicos de sífilis (aparición de erosiones, úlceras, ganglios linfáticos agrandados) y linfadenopatía regional; en este caso, RPGA para sífilis es una prueba indispensable, ya que permite identificar la enfermedad en las etapas primaria, secundaria y terciaria;
• la aparición de signos de alopecia focal o difusa;
• si una persona tuvo contacto sexual con un portador de sífilis;
• una persona quiere convertirse en donante, donar sangre y plasma;
• RPGA está incluido en el examen preventivo anual, que se prescribe a los empleados de diversos organismos gubernamentales;
• al obtener un historial médico;
• durante la hospitalización.

¿Qué enfermedades se pueden detectar durante el diagnóstico?

Muy a menudo, un resultado positivo de la prueba indica la presencia de sífilis (en el 70% de los casos), tanto congénita como adquirida, y también puede indicar las siguientes patologías:

• Infección por VIH;
• diferentes formas de hepatitis;
• infarto de miocardio reciente;
• fiebre recurrente;
• tuberculosis;
• presencia de enfermedades de transmisión sexual;
• borreliosis transmitida por garrapatas;
• difteria;
• enfermedades difusas del tejido conectivo;
• abuso de drogas (administradas mediante inyección);
• la presencia de un proceso inflamatorio en la cavidad bucal o en el área genital;
• formación de neoplasias de naturaleza maligna;
• mononucleosis infecciosa.

Para obtener información confiable, es necesario donar sangre teniendo en cuenta todas las recomendaciones médicas; de lo contrario, es posible que no se identifique el agente causante de la sífilis.

¿Por qué se prescribe RPGA para diagnosticar la sífilis?

Los pacientes a menudo se preguntan por qué se prescribe RPGA cuando se sospecha sífilis. Los expertos dicen que las pruebas son tan populares porque en el 99% de los casos dan el resultado correcto.

La reacción de aglutinación no ocurrirá solo si no hay anticuerpos contra el treponema en el cuerpo; de lo contrario, el examen mostrará definitivamente su presencia.

La práctica médica muestra que la sensibilidad de la prueba es muy alta y se detectará una reacción positiva incluso en etapas latentes de la enfermedad. Gracias a su alto rendimiento, la prueba sigue siendo relevante incluso hoy.

Uso de RPGA para otras patologías

La donación de biomaterial para este estudio a menudo se prescribe en caso de sospecha de tos ferina, fiebre tifoidea o yersiniosis (una enfermedad infecciosa aguda del tracto gastrointestinal). Esta demanda se debe a que RPGA supera en sensibilidad y eficacia a casi todas las pruebas serológicas.

La prueba ayuda a identificar la mayoría de las dolencias causadas por células patógenas y rickettsias. En este caso, se pueden utilizar como antígenos los ingredientes de vacunas bacterianas, extractos bacterianos (con sarampión o tos ferina diagnóstica) y antígenos purificados de diversos microorganismos.

Principales ventajas del método.

Esta técnica se utiliza activamente en todo el mundo, no sólo porque es muy eficaz, sino también por ciertas ventajas:

• la prueba no es difícil; el paciente sólo necesita donar sangre;
• No se necesita equipo especial para realizar el estudio;
• el estudio no lleva mucho tiempo, normalmente se informa al paciente del resultado dentro de las 24 horas;
• la prueba tiene alta sensibilidad y especificidad para la sífilis.

Características del evento

Se requiere sangre venosa para la prueba. Para que la transcripción sea confiable, el paciente debe prepararse de manera responsable para el análisis y seguir estrictamente los consejos médicos.

• la donación de material biológico solo está permitida con el estómago vacío;
• antes del evento (si la donación de sangre se realiza durante el día o la noche), solo se le permite beber agua mineral sin gases; es necesario beber líquido en pequeñas cantidades;
• Está prohibido fumar un par de horas antes de la entrega del biomaterial;
• Está estrictamente prohibido beber alcohol dos días antes del procedimiento;
• si el paciente está tomando algún medicamento, se debe notificar al médico tratante al respecto;
• Si una persona no se siente bien, es mejor posponer la extracción de sangre para otro día, ya que esto puede afectar negativamente la interpretación del resultado.

El paso más importante es seleccionar una clínica adecuada. Es mejor donar sangre en un centro de diagnóstico moderno y con buena reputación.

¿Cuánto tiempo lleva el análisis?

Es imposible decir exactamente cuánto tiempo lleva descifrar los resultados. Su velocidad depende del tipo de investigación en sí, así como del equipo utilizado.

La mayoría de las veces, el RPGA se descifra en 24 horas, pero en algunos casos el procedimiento puede tardar de 2 a 4 días. Si el laboratorio está muy cargado, el paciente recibirá un formulario con los resultados no antes de 5 días.

Decodificando los resultados

Para detectar la presencia de patología, se debe agregar un suero especial a la sangre obtenida. Si hay treponemas en el cuerpo humano, se producirá una reacción de aglutinación, como resultado de lo cual precipitarán los glóbulos rojos.

La cantidad de glóbulos rojos pegados depende en gran medida de la cantidad de anticuerpos presentes en el reactivo. La hemaglutinación pasiva no sólo muestra la presencia de anticuerpos, sino que también le da al médico la oportunidad de determinar su cantidad.

Resultado positivo

Si la prueba muestra una reacción positiva, esto indica la presencia del patógeno. Para hacer un diagnóstico más preciso, el paciente debe ser remitido a diagnósticos instrumentales y de laboratorio adicionales.

Una etapa integral del examen es comprobar a todos los miembros de la familia y a las personas con las que la persona infectada ha tenido contacto sexual.

Como muestra la práctica médica, aproximadamente el 5% de los pacientes tienen una reacción falsa positiva durante la prueba, lo que puede ocurrir si se ignora la etapa preparatoria, así como con:

• formación de tumores oncológicos;
• patologías del tejido conectivo;
• la presencia de hepatitis de diversas formas;
• Infecciones por VIH.

Además, puede producirse un resultado débilmente positivo durante el embarazo. Una reacción falsa "+" casi siempre va acompañada de un título bajo. Un punto interesante es que si una persona ha tenido sífilis al menos una vez, la reacción RPGA siempre será positiva.

Las únicas excepciones son aquellos casos en los que la sífilis se detectó en una etapa temprana y luego se inició inmediatamente una terapia intensiva.

resultado negativo

Las pruebas dan una respuesta negativa en los siguientes casos:

• el paciente no tiene microorganismos patógenos en el cuerpo que causen sífilis;
• han pasado menos de 3 semanas desde la infección y el sistema inmunológico aún no ha comenzado a producir anticuerpos;
• La sangre se extrajo incorrectamente de una vena.

Incluso si las pruebas muestran "-", los expertos recomiendan someterse a pruebas adicionales para estar seguros y asegurarse de que no haya microorganismos patógenos.

Precisión del resultado

Numerosos estudios clínicos han confirmado que se garantiza que esta técnica dará el resultado correcto si el análisis se realizó cumpliendo con todas las reglas y el paciente cumplió estrictamente con las recomendaciones médicas antes de la extracción de sangre.

Si la prueba es positiva, hay más de un 95% de posibilidades de que la persona esté infectada con sífilis.

Una reacción incorrecta sólo puede ocurrir si ha pasado muy poco tiempo desde la infección o si el asistente de laboratorio no siguió las instrucciones durante el estudio.

En cuanto a un resultado falso positivo, puede ocurrir si el diagnóstico se realizó en presencia de enfermedades infecciosas o condiciones patológicas.

Un resultado falso se diferencia de un verdadero positivo en que se vuelve negativo muy rápidamente si se vuelve a realizar la prueba después de 2 semanas.

Por el momento, el análisis RPGA sigue siendo la prueba más eficaz y fiable para determinar la sífilis y otras patologías peligrosas. Por tanto, si sospechan la presencia de muchas enfermedades, lo primero que hacen los médicos es derivar al paciente a RPGA.

Uno de los análisis de sangre más importantes para el organismo es la prueba RPHA. Puede utilizarse para determinar la presencia de patógenos como la sífilis en el cuerpo. Este análisis es reconocido como una de las formas más confiables de determinar si el cuerpo está afectado por la sífilis. Conozcámoslo con más detalle.

La abreviatura RPHA se refiere a una reacción especial que revela hemaglutinación pasiva en el cuerpo. Con esta reacción se puede detectar el proceso de aglutinación. Además, durante este proceso, se revela la presencia de antígenos de treponema pallidum en las capas superficiales de muchos de ellos. Este organismo es el agente causante de la sífilis.

Cuando Treponema pallidum ingresa al cuerpo de una persona sana, provoca el desarrollo de una respuesta inmune. Durante este proceso, el cuerpo produce tipos de anticuerpos no específicos o no treponémicos y específicos o treponémicos.

La presencia de anticuerpos contra Treponema pallidum en la muestra de sangre donada es una confirmación exhaustiva de la sífilis en el laboratorio.

Todas las pruebas serológicas realizadas en el laboratorio se dividen en dos grupos:

1. Tipo específico de estudio (treponémico);
2. Tipo de estudio inespecífico (no treponémico).

La división de los estudios en estos grupos se basa en el tipo de anticuerpos que se detectan en RPHA. La determinación de la reacción de hemaglutinación pasiva o RPHA es un tipo de investigación específico en relación con el agente causante de la sífilis.

La reacción ocurre en presencia de anticuerpos antitreponémicos. Esta reacción fue practicada por primera vez por uno de los científicos en 1965 e inmediatamente obtuvo un amplio reconocimiento entre colegas y pacientes. Hoy en día, con este método se diagnostica con éxito una enfermedad del cuerpo humano como la sífilis. Y la metodología para determinarlo pertenece a la categoría de pruebas específicas (treponémicas).

Con este método de diagnóstico altamente sensible, se determina fácilmente la presencia de cualquier etapa de sífilis en el cuerpo:

1. Primario
2. Latente
3. Secundario
4. Terciario

Puede encontrar más información sobre la sífilis en el vídeo.

Al donar sangre para RPGA, los datos de las reacciones de microprecipitación se confirman con una precisión de las fracciones más pequeñas. RPGA le permite identificar casos falsos positivos de desarrollo de enfermedades obtenidos durante el procedimiento.

En algunos casos, el método RPGA puede provocar un resultado falso positivo en el paciente.

Esto sucede si una persona ha desarrollado enfermedades autoinmunes. Si el cuerpo humano se ve afectado por un determinado grupo de enfermedades virales, durante cuyo desarrollo aumenta la cantidad de anticuerpos inespecíficos del paciente, los datos de RPGA también pueden ser falsos. La razón de esto es el uso de glóbulos rojos sensibilizados mediante este método.

¿Cuándo es necesario donar sangre para RPGA?

Se prescribe un análisis RPGA a un paciente si existe una sospecha del desarrollo de alguna etapa de sífilis en su cuerpo. Además, este análisis es necesario para determinadas categorías de mujeres. Es en las primeras etapas que la detección de esta enfermedad permitirá prescribir el tratamiento adecuado y planificar el embarazo, con el objetivo de dar a luz a un bebé sano.

También se prescribe la donación de sangre para determinar la sífilis en el cuerpo cuando se prepara al paciente para la operación programada. Es en este caso que es posible un resultado exitoso de la intervención quirúrgica en el cuerpo. Además, la confirmación de la presencia de patógenos de la sífilis en el cuerpo permitirá a los médicos planificar el curso de la próxima operación de tal manera que el efecto terapéutico esperado sea máximo.

La determinación de agentes de sífilis en la sangre mediante el método RPGA también es importante para realizar pruebas a los donantes antes de donar sangre.

Gracias a RPHA, en este caso es posible prevenir cientos de casos de infección de receptores con sangre de pacientes con sífilis. Al mismo tiempo, hay muchos casos en los que las personas acuden a los centros de donación de sangre como donantes y, tras donarla a la RPGA, descubren que tienen sífilis.

Se necesita algún tiempo para determinar los agentes causantes de la sífilis en su cuerpo y se conocen los resultados. Por lo general, RPGA da un indicador positivo después de cuatro semanas después de la infección inicial.

En muchos casos, la etapa primaria de la enfermedad se caracteriza por tasas reducidas, sus datos son los siguientes: menos de 1:320; La etapa secundaria de la sífilis se acompaña de un aumento en las lecturas de titulación: poco más de 1:320. La sífilis latente vuelve a producir títulos bajos.

Habiendo completado el tratamiento prescrito para la etapa establecida de sífilis, un análisis de sangre para RPHA en este paciente aún muestra un resultado positivo.

Y este no es un caso aislado, sino generalizado y se confirma a lo largo de la vida en esta categoría de personas.

Procedimiento de preparación y análisis en sí.

Antes de donar sangre, verifique la presencia de patógenos como la sífilis.

Después de todo, es precisamente la distorsión de los datos de un análisis tan importante lo que puede provocar que al paciente se le prescriba un tratamiento incorrecto, y esto, como sabemos, puede provocar el desarrollo de otras patologías en el organismo.

La preparación para este análisis es bastante sencilla:

1. Para empezar, debe rechazar cualquier ingesta de alimentos antes de donar sangre para RPGA. En otras palabras, debe venir a hacerse el análisis con el estómago vacío.
2. Tampoco es recomendable consumir una cantidad importante de líquidos antes de donar sangre para RPGA. Los componentes de las bebidas que ingiere el paciente también pueden afectar los resultados de este análisis.
3. Lo mejor es realizar esta prueba en la primera mitad del día, ya que te resultará bastante complicado estar sin comida y agua durante todo el día.
4. Antes de realizar la prueba de RPHA, se recomienda al paciente que se abstenga de fumar durante treinta minutos. Las sustancias contenidas en el humo del tabaco pueden distorsionar la fiabilidad de los resultados de este análisis.

   El procedimiento para tomar una muestra de sangre es bastante sencillo y casi indoloro. Después del procedimiento, el especialista del laboratorio definitivamente fijará un horario en el que podrá venir para obtener los resultados finales.