Reacción de hemaglutinación indirecta. Rpga o reacción de hemaglutinación pasiva, ¿qué tipo de análisis de sangre es hemaglutinación Vi?

Un análisis de sangre realizado correctamente ayuda a detectar los agentes causantes de diversas enfermedades complejas en el cuerpo en las primeras etapas de su desarrollo y, a veces, incluso antes de que aparezcan los síntomas clínicos de la enfermedad. Muy a menudo, los médicos prescriben a los pacientes una prueba de reacción de aglutinación. A continuación, descubriremos qué es: un análisis de sangre RPGA, ¿cuándo se utiliza y qué nos puede decir?

Principio de funcionamiento

La reacción de hemaglutinación indirecta (también llamada reacción de hemaglutinación pasiva, también conocida como RPHA, RNGA) ocurre cuando los eritrocitos que han adsorbido un antígeno se exponen a un suero inmune que coincide con el antígeno dado.

Los estudios han demostrado que este método es significativamente superior a otras pruebas serológicas en términos de especificidad y sensibilidad. Por ello, se suele utilizar para detectar enfermedades causadas por bacterias o rickettsias. Los antígenos para dicho análisis pueden ser extractos bacterianos, antígenos purificados de diversos microbios y componentes de vacunas bacterianas.

Después de que una bacteria patógena ingresa al cuerpo humano, comienza a producir anticuerpos específicos e inespecíficos, formando una respuesta inmune específica. En el caso de la sífilis, cuyo agente causal es Treponema pallidum, que pertenece a las espiroquetas gramnegativas, en la sangre humana se producen anticuerpos treponémicos o no treponémicos. Las pruebas de diagnóstico de laboratorio se basan en su identificación, que debe confirmar o refutar la presencia del agente causante del virus en el organismo.

Con RPHA, los glóbulos rojos, cuya superficie ha adsorbido antígenos de treponema pallidum, cuando se agrega suero con anticuerpos contra treponema del material de una persona infectada con sífilis, se adhieren entre sí, es decir, se aglutinan.

Fiabilidad del estudio.

Es importante recordar que los anticuerpos contra la espiroqueta pálida comienzan a aparecer en el cuerpo de las personas infectadas entre 2 y 4 semanas después de la infección y, en algunos casos, este período puede extenderse hasta 6 semanas.

Por esta razón, la sensibilidad del análisis de RPHA en la etapa primaria de la enfermedad es de aproximadamente el 86%, lo que es significativamente inferior a la precisión del diagnóstico de pacientes en las dos etapas siguientes. La sensibilidad del análisis para estos pacientes, así como para los portadores de sífilis latente, alcanza el 99-100%.

Sin embargo, la reacción de hemaglutinación pasiva tiene una especificidad muy alta, que alcanza un nivel del 96-100%.

Esto permite utilizar este examen para confirmar el diagnóstico en caso de una reacción positiva de un estudio preliminar no treponémico, por ejemplo, una reacción de microprecipitación del cáncer de vejiga.

Teniendo en cuenta que la sensibilidad de las pruebas treponémicas, incluida la RPGA, excede significativamente la sensibilidad de los métodos no treponémicos, estos exámenes se prescriben cada vez más al realizar pruebas de detección de sífilis. Sin embargo, si se recibe una reacción positiva de una prueba de detección, se requiere otro análisis específico (treponémico), pero no RPGA, para aclarar el diagnóstico.

Transcripción del análisis

Cuando se agrega suero con anticuerpos contra treponema del material de una persona infectada con sífilis al reactivo con el que se realiza el estudio, los glóbulos rojos se aglutinan, como resultado de lo cual precipitan.

La cantidad de glóbulos rojos pegajosos está influenciada por el nivel de anticuerpos en el suero. Por lo tanto, la hemaglutinación pasiva no solo muestra la presencia de anticuerpos, sino que también permite determinar su cantidad. El resultado del estudio se presenta por el nivel de título de anticuerpos.

Una reacción positiva indica la presencia del patógeno en el cuerpo del paciente. Sin embargo, durante el proceso de diagnóstico, pueden ocurrir reacciones falsas positivas, cuyo número no excede estadísticamente el nivel del 0,05-2,5% del número total de estudios.

Puede ocurrir una reacción positiva de RPHA en personas no infectadas con sífilis si:

• enfermedades sistémicas del tejido conectivo,
• en la sangre del paciente anticuerpos contra patógenos similares a Treponema pallidum,
• patologías fisiológicas, como el infarto de miocardio,
• hepatitis B o C,
• enfermedades oncológicas,
• tifus, leptospirosis, tuberculosis,
• infecciones por VIH,
• borreliosis de etiología transmitida por garrapatas,
• lesiones extensas o fracturas,
• embarazo,
• en caso de inyección de estupefacientes.

En la mayoría de los casos, las reacciones falsas positivas van acompañadas de un título bajo. Los títulos altos son típicos de la etapa secundaria de la enfermedad y de una sífilis previamente latente. Sin embargo, también pueden aparecer durante una reacción falsa positiva en pacientes con neoplasias malignas.

En personas que han tenido sífilis al menos una vez, la reacción RPHA sigue siendo positiva por el resto de sus vidas.

Las raras excepciones pueden ser aquellas situaciones en las que la enfermedad se identificó en una etapa temprana de desarrollo, después de lo cual se llevó a cabo una terapia intensiva y eficaz. Por lo tanto, el análisis RPGA no se puede utilizar para evaluar la dinámica de recuperación o el diagnóstico comparativo de las etapas tempranas o tardías de la enfermedad.

Si se obtiene una reacción positiva, es necesario examinar a los familiares del enfermo y a las personas que hayan tenido contacto sexual con él.

Se puede obtener una reacción negativa en los siguientes casos:

• la persona no tiene sífilis,
• la sangre se extrajo incorrectamente para la prueba,
• Han pasado de 2 a 4 semanas desde la infección y la producción de anticuerpos aún no ha comenzado.

En cualquier caso, el resultado del estudio debe evaluarse en combinación con indicadores anamnésicos y de laboratorio adicionales.

¿A quién está indicado el análisis?

Un médico puede derivar pacientes a donar sangre para RPHA en los siguientes casos:

• en presencia de manifestaciones clínicas de sífilis: erupciones ulcerosas, agrandamiento de los ganglios linfáticos, alopecia difusa y otros,
• si sospecha de una posible infección en caso de contacto con personas ya enfermas,
• donantes que deseen donar sangre,
• personas que se someten a exámenes preventivos anuales o que expiden certificados de salud,
• pacientes con una prueba de detección positiva,
• antes de la hospitalización en un hospital para pacientes hospitalizados,
• durante el examen preoperatorio,
• identificar patógenos de salmonelosis, difteria y disentería utilizando el método RPGA con el diagnóstico adecuado.

Procedimiento para realizar el estudio.

Se envía para su análisis una muestra de sangre venosa donada por el paciente. Para no llegar a una conclusión errónea, el paciente debe ser responsable en la preparación del análisis. Para que los resultados de la prueba sean confiables, se deben seguir las siguientes recomendaciones:

• La prueba sólo debe realizarse con el estómago vacío.
• El día del análisis se puede beber agua mineral sin gas en cantidades mínimas.
• No conviene fumar al menos 30 minutos antes del análisis, pero es mejor aumentar este tiempo a varias horas.
• Se impone una prohibición directa al consumo de bebidas alcohólicas.
• Los pacientes que necesiten utilizar algún medicamento con regularidad deben informar al médico que los remita para un examen.
• Si se siente mal o no se siente bien, debe notificar a la enfermera que le está extrayendo la sangre o al médico de la clínica ambulatoria donde debe realizar la prueba.

Sea responsable no sólo de la cuestión de dónde hacerse la prueba, sino también de la preparación para el examen.

Diagnóstico de otras enfermedades infecciosas.

No se debe pensar que un estudio como RPGA se puede realizar únicamente para identificar el agente causante de la sífilis en el cuerpo.

Un análisis con Salmonella diagnosticum le permite detectar la presencia de una infección en el sistema digestivo: la salmonella. A partir del cuarto día después de la infección, el cuerpo produce anticuerpos contra los antígenos de Salmonella, que el método RPGA ayuda a identificar. Un resultado negativo indica la ausencia de infección, y un título positivo, que aumenta de 1:200 a 1:800 en la fase aguda, indicará su presencia.

El método de realizar RPHA con un marcador de difteria permite diagnosticar la difteria y evaluar la inmunidad después de la vacunación. El sistema inmunológico comienza a producir anticuerpos al día siguiente de la infección y permanecen en el cuerpo durante varias semanas. La sensibilidad de este análisis es superior al método de investigación bacteriológica. Un título de 1:80 confirma la presencia de difteria en el cuerpo.

El marcador de disentería para RPHA detecta con mayor precisión la shigelosis (disentería bacteriana), incluso en comparación con el método de diagnóstico de laboratorio mediante cultivo bacteriano. Si el paciente no recibe un tratamiento de calidad, la enfermedad se convierte en un proceso crónico, en el que a menudo se producen recaídas. El análisis le permite diagnosticar las fases aguda y crónica de la diarrea, identificar el agente causante de la disentería, distinguir la shigelosis bacteriana del cáncer colorrectal, los trastornos endocrinos o la inflamación del colon. Una reacción negativa indica la ausencia del bacilo y su presencia se confirma mediante un título de 1:80 para niños o 1:320 para adultos.

La realización de una prueba con un marcador de sarampión le permite determinar la enfermedad del sarampión. Un examen de este tipo puede convertirse en una alternativa al análisis RTGA que se realiza con frecuencia para diagnosticar el sarampión.

Entonces, análisis de sangre RPGA: ¿qué es? En resumen, podemos decir con seguridad que se trata de un método moderno, muy sensible y fiable para diagnosticar diversas enfermedades de etiología bacteriológica.

HEMAGLUTINACIÓN

hemaglutinación(del griego háima sangre y lat. agglutinatio pegado), pegado y precipitación de glóbulos rojos bajo la influencia de bacterias, virus, toxinas, etc., capaces de adsorberse en la superficie de los glóbulos rojos, así como hemaglutininas. Los glóbulos rojos de un animal pueden ser aglutinados por el suero de otro debido a la presencia de isohemaglutininas (anticuerpos) normales en él. Usando reacción GRAMO. instalar . Fenómeno GRAMO. utilizado en estudios microbiológicos e inmunológicos.

Los hay directos o activos e indirectos o pasivos. GRAMO. Derecho GRAMO. causado por el efecto directo de agentes bacterianos y virales sobre los glóbulos rojos. GRAMO. En este caso, las hemaglutininas, utilizando la enzima mucinasa, interactúan con los receptores de mucoproteasa ubicados en la superficie de los eritrocitos, provocando la adsorción del antígeno. Como resultado, una suspensión de glóbulos rojos (por ejemplo, de pollo) forma un sedimento ancho en forma de paraguas con bordes dentados. Esta reacción no es específica y ocurre sin la participación del suero inmunológico. Directo GRAMO. utilizado en estudios serológicos, en particular para determinar la dilución de trabajo del antígeno utilizado en la reacción de inhibición. GRAMO., que se basa en el retraso del efecto hemaglutinante del antígeno por parte del suero inmune específico. Directo GRAMO. También se utilizan para el diagnóstico provisional de determinadas enfermedades virales (influenza equina, peste aviar, enfermedad de Newcastle, gripe de los patos). Indirecto GRAMO.(RNGA) se basa en la capacidad de los eritrocitos sensibilizados (por adsorción de antígeno sobre ellos) de aglutinarse con anticuerpos homólogos del suero inmune. Debido a la alta sensibilidad y especificidad de la indirecta GRAMO. se utiliza para diagnosticar muchas enfermedades virales, bacterianas y rickettsiológicas. Hay varias modificaciones de indirecta.

reacciones de inhibición, retraso, neutralización de anticuerpos, etc. Usando RNGA y sus modificaciones, se pueden detectar tanto anticuerpos en el suero sanguíneo de animales y humanos (usando eritrocitos sensibilizados con un antígeno conocido) como antígeno (usando eritrocitos sensibilizados con ciertos anticuerpos). . Para la reacción se utilizan eritrocitos lavados de diferentes especies animales (la mayoría de las veces eritrocitos de oveja y pollo). La capacidad de los eritrocitos para adsorber antígenos proteicos de gran peso molecular aumenta después del tratamiento con taninos. Para aumentar la vida útil de los glóbulos rojos, se conservan con formaldehído. Los diagnósticos obtenidos a partir de eritrocitos formalizados pueden conservar su actividad durante mucho tiempo. Con la disponibilidad de diagnósticos de eritrocitos ya preparados, la formulación de la reacción se simplifica enormemente. En la práctica veterinaria, RNGA se utiliza para diagnosticar algunas enfermedades animales (principalmente virales): la peste aviar clásica, la enfermedad de Newcastle, la viruela vacuna, la influenza equina, la influenza porcina y de los patos, la pullorosis, el tifus aviar, etc.
Literatura:
Manual de métodos de investigación microbiológica y virológica, ed. M. O. Birger 2ª ed., M., 1973.




Diccionario enciclopédico veterinario. - M.: "Enciclopedia soviética". Editor en jefe V.P. Shishkov. 1981 .

Sinónimos:

Vea qué es "HEMAGLUTINACIÓN" en otros diccionarios:

hemaglutinación- hemaglutinación... Diccionario de ortografía-libro de referencia

hemaglutinación- apiñamiento, aglutigación Diccionario de sinónimos rusos. hemaglutinación sustantivo, número de sinónimos: 2 aglutinación (3) ... Diccionario de sinónimos

HEMAGLUTINACIÓN- (de hemo... y lat. aglutinatio pegado) pegado y precipitación de glóbulos rojos suspendidos en líquido bajo la influencia de diversos agentes, por ejemplo, anticuerpos, bacterias o virus. La reacción de hemaglutinación se utiliza para el diagnóstico... ... Gran diccionario enciclopédico

Hemaglutinación- el proceso de pegar glóbulos rojos en agregados visibles a simple vista. G. es causada por: 1) Abs a eritrocitos y Ags heterófilos; 2) Antígeno contra antígenos extraños a los eritrocitos, adsorbidos en su superficie (ver Reacción de hemaglutinación pasiva); 3) ... Diccionario de microbiología

HEMAGLUTINACIÓN- HEMAGLUTINACIÓN, aglutinación (aglomeración) de glóbulos rojos cuando se mezclan con sueros homólogos. Si los glóbulos rojos humanos se reemplazan con suero de la misma persona, al agitarlos se obtendrá una suspensión uniforme. Si los glóbulos rojos de una persona... ... Gran enciclopedia médica

hemaglutinación- El fenómeno subyacente al método de determinación de anticuerpos, basado en la aglutinación de los eritrocitos como resultado de la unión a los antígenos de los propios eritrocitos o a otros antígenos adheridos artificialmente a la superficie de los eritrocitos.... ... Guía del traductor técnico- (heme + aglutinación) aglutinación de eritrocitos ... Gran diccionario médico

Hemaglutinación- del griego sangre de haima y lat. aglutinatio pegado), el proceso de pegado y posterior sedimentación de los glóbulos rojos; causada por hemaglutininas (Ver Hemaglutininas), bacterias y virus, agentes capaces de adsorberse en... ... Gran enciclopedia soviética

hemaglutinación- pegado (aglutinación) de glóbulos rojos. Se desarrolla, incluso durante la transfusión de sangre incompatible.

En el laboratorio se utilizan dos reacciones de hemaglutinación con diferentes mecanismos de acción.

La primera RGA es serológica. En esta reacción, los glóbulos rojos se aglutinan al interactuar con los anticuerpos correspondientes (hemaglutininas). La reacción se usa ampliamente para determinar los grupos sanguíneos.

La segunda RGA no es serológica. En él, la adhesión de los glóbulos rojos no es causada por

anticuerpos, sino sustancias especiales formadas por virus. Por ejemplo, el virus de la influenza aglutina los glóbulos rojos de pollos y cobayas, y el virus de la polio aglutina los glóbulos rojos de las ovejas. Esta reacción nos permite juzgar la presencia de un virus en particular en el material en estudio.

La reacción se realiza en tubos de ensayo o en placas especiales con pocillos. El material analizado para detectar la presencia del virus se diluye con una solución isotónica de 1:10 a 1:1280; Se mezclan 0,5 ml de cada dilución con un volumen igual de suspensión de glóbulos rojos al 1-2%. En el control se mezclan 0,5 ml de eritrocitos con 0,5 ml de solución isotónica. Los tubos de ensayo se colocan en un termostato durante 30 minutos y las placas se dejan a temperatura ambiente durante 45 minutos.

Contabilidad de resultados. Si la reacción es positiva, aparece un sedimento de glóbulos rojos con bordes festoneados (“paraguas”) en el fondo del tubo de ensayo o del pocillo, cubriendo todo el fondo del pocillo. Si el resultado es negativo, los glóbulos rojos forman un sedimento denso con bordes lisos (“botón”). El mismo sedimento debería estar en el control. La intensidad de la reacción se expresa mediante signos "+". El título de virus es la dilución máxima del material en el que se produce la aglutinación.

Reacción de inhibición de la hemaglutinación.

Se trata de una reacción serológica en la que anticuerpos antivirales específicos, al interactuar con el virus (antígeno), lo neutralizan y lo privan de la capacidad de aglutinar glóbulos rojos, es decir, inhibir la reacción de hemaglutinación. Esta reacción le permite determinar el tipo y tipo de virus.

Preparando una reacción. Se mezclan 0,25 ml de suero antiviral con un volumen igual de material que contiene el virus. La mezcla se agita y se coloca en un termostato durante 30 minutos, después de lo cual se añaden 0,5 ml de suspensión de glóbulos rojos al 1-2%.

Contabilidad de resultados. Si el experimento se lleva a cabo correctamente, se debe formar un "botón" en el control del suero y los eritrocitos; no hay ningún factor que aglutine los eritrocitos; en el control de antígenos, se forma un "paraguas": el virus provocó la aglutinación de los glóbulos rojos. Si el suero es homólogo al virus en estudio, se forma un "botón": el suero ha neutralizado el virus.

Reacción de hemaglutinación indirecta

La reacción de hemaglutinación indirecta (pasiva) (RIHA) se basa en el hecho de que los glóbulos rojos, si se adsorbe un antígeno soluble en su superficie, adquieren la capacidad de aglutinarse al interactuar con anticuerpos contra el antígeno adsorbido.

Preparando una reacción. El suero se calienta durante 30 minutos a 56 °C, se diluye secuencialmente en una proporción de 1:10 - 1:1280 y se vierte en tubos o pocillos de 0,25 ml, donde luego se añaden 2 gotas de glóbulos rojos con antígenos adsorbidos.

Controles: una suspensión de eritrocitos con antígenos adsorbidos con suero obviamente inmune, una suspensión de eritrocitos con antígenos adsorbidos con suero normal; una suspensión de glóbulos rojos normales con suero problema. En el primer control debería producirse aglutinación, en el segundo y tercero no debería producirse.

Preguntas de prueba.

1. ¿Qué indica un resultado positivo de un análisis de rayos X entre los glóbulos rojos y el material que se analiza para detectar la presencia del virus?

2. ¿Se producirá una reacción de aglutinación de los glóbulos rojos si se les añade un virus y su correspondiente suero? ¿Cómo se llama la reacción que revela este fenómeno?

TRABAJO PRÁCTICO N°12.

Reacción de fijación del complemento.

La reacción de fijación del complemento (FFR) se basa en el hecho de que un complejo antígeno-anticuerpo específico siempre adsorbe (se une) el complemento a sí mismo.

Esta reacción es muy utilizada en la identificación de antígenos y en el serodiagnóstico de infecciones, especialmente enfermedades causadas por espiroquetas (reacción de Wassermann), rickettsias y virus.

RKS es una reacción serológica compleja. Implica complemento y dos sistemas antígeno-anticuerpo. Básicamente, se trata de dos reacciones serológicas.

El sistema principal derecho consta de un antígeno y un anticuerpo (uno se conoce y el otro no). Se le añade una cierta cantidad de complemento. Si el antígeno y el anticuerpo de este sistema coinciden, se conectarán y unirán un complemento. El complejo resultante está finamente disperso y no es visible.

La formación de este complejo se detecta mediante un segundo sistema hemolítico o indicador. Incluye glóbulos rojos de oveja (antígeno) y el suero hemolítico correspondiente (anticuerpo), es decir. complejo inmunológico ya preparado. En este sistema, la lisis de los glóbulos rojos sólo puede ocurrir en presencia de complemento. Si el complemento está ligado al primer sistema, entonces en el segundo sistema no habrá hemólisis, porque sin complemento gratuito. La ausencia de hemólisis (el contenido del tubo está turbio o hay un sedimento de eritrocitos en el fondo) se registra como resultado positivo de RSC.

Si en el primer sistema el antígeno no se corresponde con el anticuerpo, entonces no se formará el complejo inmunológico y el complemento quedará libre. Al permanecer libre, el complemento participa en el segundo sistema, provocando hemólisis, el resultado del RSC es negativo (el contenido de los tubos es transparente - "sangre lacada").

Componentes, reacciones de fijación del complemento:

1. Antígeno: generalmente lisado, extracto, hapteno,

con menos frecuencia una suspensión de microorganismos.

2. Anticuerpo - suero del paciente.

3. Complemento - suero de cobaya.

4. Antígeno: eritrocitos de oveja.

5. Anticuerpo: hemolisina contra eritrocitos de oveja.

6. Solución isotónica.

Debido al hecho de que en RSC intervienen una gran cantidad de componentes complejos,

primero deben titularse y hacerse reaccionar en cantidades exactas y en volúmenes iguales: 0,5 o 0,25, con menos frecuencia 0,2, 1,25 o 1,0 ml (volumenes mayores dan un resultado más preciso). La titulación de los componentes de la reacción se lleva a cabo en el mismo volumen que el experimento, reemplazando los ingredientes faltantes con una solución isotónica.

1. Reacción de hemaglutinación

(RGA)

un método para detectar e identificar virus, basado en la capacidad de algunos virus de aglutinar selectivamente los glóbulos rojos de determinadas especies animales.

RGA se basa en el fenómeno de adhesión de los glóbulos rojos, que se produce bajo la influencia de diversos factores. Hay hemaglutinación directa e indirecta. En la reacción de hemaglutinación directa, los glóbulos rojos se pegan entre sí cuando ciertos antígenos, como los virus, se adsorben en ellos.

En los estudios serológicos se utiliza una reacción de inhibición directa de la hemaglutinación, cuando el virus aislado de un paciente se neutraliza con suero inmune específico y luego se combina con glóbulos rojos. La ausencia de hemaglutinación indica la consistencia del virus y del suero inmunológico utilizado.

La reacción de hemaglutinación indirecta (hemaglutinación pasiva) se observa en los casos en que se añade suero inmune o suero del paciente que contiene anticuerpos apropiados a los glóbulos rojos que han sido previamente tratados (sensibilizados) con diversos antígenos. Se produce un pegado específico de los glóbulos rojos, su hemaglutinación pasiva.

La reacción de hemaglutinación indirecta o pasiva es superior en sensibilidad y especificidad a otros métodos serológicos y se utiliza en el diagnóstico de infecciones causadas por bacterias, rickettsias y protozoos.

El método para realizar una reacción de hemaglutinación indirecta consta de varias etapas. Primero, los glóbulos rojos se lavan con una solución isotónica de cloruro de sodio y luego, si es necesario (cuando se utilizan antígenos proteicos), se tratan con una solución de tanino 1: 20.000 y se sensibilizan con antígenos solubles. Después de lavar con una solución isotónica tamponada de cloruro de sodio, el antígeno eritrocitario está listo para su uso. Los sueros problema se diluyen con una solución isotónica de cloruro de sodio en tubos de ensayo o placas de plástico especiales con pocillos, luego se agrega un diagnóstico de eritrocitos a cada dilución del suero. Los resultados de la reacción de hemaglutinación indirecta se tienen en cuenta por la naturaleza del sedimento de glóbulos rojos formado en el fondo del tubo. Un resultado de reacción en el que los glóbulos rojos cubren uniformemente todo el fondo del tubo se considera positivo. En una reacción negativa, los glóbulos rojos en forma de un pequeño disco o "botón" se encuentran en el centro del fondo del tubo de ensayo.

Usando RGA

RGA se utiliza para la indicación (detección) de virus durante el diagnóstico preliminar, para la titulación de virus según sus propiedades hemaglutinantes (establecimiento de unidades hemaglutinantes - AE).

Adsorción de virus

La base del fenómeno de aglutinación causado por virus es la adsorción de virus en la superficie de los glóbulos rojos, acompañada de pegado (aglutinación) de estos últimos y precipitación.

Antígeno para RGA

Como antígeno de RGA se toma cualquier material (material patológico en forma de suspensión de órganos, material de CE infectado, cultivos de tejidos, etc.) en el que se sospeche la presencia de un virus. El material debe ser líquido, sin partículas grandes.

Configurar un RGA aproximado

Para configurar una RGA aproximada, se aplica una gota de material que contiene virus a un portaobjetos de vidrio limpio y bien desengrasado, se le agrega una gota de una suspensión de glóbulos rojos al 5% y se mezcla con una varilla de vidrio.

Evaluación de la reacción del RGA.

La reacción se evalúa en cruces (más). Al evaluar la reacción en cruces, preste atención a la naturaleza del sedimento. Si los glóbulos rojos se depositan en una capa delgada uniformemente a lo largo del fondo del tubo de ensayo (en forma de paraguas), la reacción se califica con cuatro cruces.

2. Reacción de inhibición de la hemaglutinación.- una reacción serológica basada en la capacidad de los anticuerpos para prevenir la aglutinación de eritrocitos mediante tipos de virus hemaglutinantes (adenovirus, arbovirus, algunos enterovirus, virus de la influenza y parainfluenza, sarampión, reovirus). Los anticuerpos antivirales específicos interactúan con las moléculas de hemaglutinina de superficie de los viriones de estos virus y bloquean su unión a moléculas complementarias de la membrana de los eritrocitos.

Recientemente, la reacción se ha utilizado ampliamente en los laboratorios de virología clínica para determinar títulos de anticuerpos específicos contra ciertos virus, así como para la identificación serológica y la tipificación de virus aislados a partir de material clínico de pacientes. Su uso es algo limitado debido a la presencia en el suero sanguíneo humano de inhibidores virales inespecíficos, así como de anticuerpos naturales: las aglutininas.

Reacción de inhibición de la hemaglutinación (HAI). A pesar de su nombre, el principio de la reacción es en muchos aspectos similar al pH de los virus, ya que se basa en la capacidad de AT para unirse a varios virus y neutralizarlos, imposibilitando la aglutinación de los glóbulos rojos. Visualmente, este efecto se manifiesta en la "inhibición" de la hemaglutinación. RTGA se utiliza en el diagnóstico de infecciones virales para identificar antihemaglutininas específicas e identificar varios virus por sus hemaglutininas, que exhiben las propiedades de Ag.

Reacción de inhibición de la hemaglutinación.

(RTGA)

un método para identificar un virus o detectar anticuerpos antivirales en el suero sanguíneo de un paciente, basado en el fenómeno de la ausencia de aglutinación de glóbulos rojos por un fármaco que contiene un virus en presencia de suero sanguíneo inmune a él.

Reacción de inhibición de la hemaglutinación. Mecanismo y uso práctico.

Muchos virus tienen la capacidad de aglutinar glóbulos rojos de especies estrictamente definidas de mamíferos y aves. Así, los virus de la gripe y las paperas aglutinan los eritrocitos de pollos, cobayas y seres humanos, y los adenovirus aglutinan los eritrocitos de ratas y ratones. En este sentido, para detectarlos en material de pacientes o cultivos de células, embriones y animales, reacción de hemaglutinación(RGA). Para ello, en los pocillos de las placas se preparan diluciones doblemente crecientes de materiales y líquidos que contienen virus, añadiéndoles suspensiones de eritrocitos NaCl lavados con una solución isotónica. Para controlar la aglutinación espontánea, los glóbulos rojos se mezclan con un volumen igual de solución isotónica de NaCl. Las mezclas se incuban en un termostato a 37°C o a temperatura ambiente.

Los resultados del análisis de rayos X se tienen en cuenta por la naturaleza de la aglutinación de eritrocitos después de 30 a 60 minutos, cuando generalmente precipitan por completo en el control. Una reacción positiva está indicada por ventajas. “++++” – sedimento en forma de “paraguas”, “+++” – sedimento con lúmenes, “++” – sedimento con lúmenes grandes, “+” – sedimento floculento rodeado por una zona de eritrocitos arrugados , y “–” – el mismo sedimento de eritrocitos claramente definido en forma de “botón” que en el control

Al ser específico de un grupo, RGA no permite determinar las especies de virus. Se identifican mediante reacciones de inhibición de la hemaglutinación(RTGA). Para prepararlo se utilizan sueros antivirales inmunes bien conocidos, que se diluyen en concentraciones dos veces decrecientes en una solución isotónica de cloruro de sodio y se vierten en los pocillos. A cada dilución se añade una cantidad igual de líquido que contiene virus. El control es una suspensión del virus en una solución isotónica de cloruro de sodio. Las placas con una mezcla de sueros y virus se mantienen en un termostato durante 30 minutos o a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se agrega a cada una de ellas una suspensión de glóbulos rojos. Después de 30 minutos, se determina el título del suero neutralizante del virus (es decir, su dilución máxima), que provocó un retraso en la aglutinación de eritrocitos.

RTGA se utiliza en el diagnóstico serológico de enfermedades virales, en particular influenza e infecciones adenovirales. Es mejor usarlo de la misma manera que RN, con sueros emparejados. Un aumento de cuatro veces en el título de anticuerpos en el segundo suero confirma el diagnóstico presuntivo

3. Estudio serológico le permite hacer un diagnóstico si se detectan anticuerpos específicos en el suero de los pacientes. Para las reacciones serológicas se utilizan sueros pareados, que se toman en los primeros días desde el inicio de la enfermedad y de 1 a 3 semanas después, pero se estudian simultáneamente. Un aumento del título de anticuerpos de 4 veces o más tiene importancia diagnóstica. RTGA, RN, RSK, RTGads, RIF, RIA, ELISA se utilizan con antígenos (diagnosticums) preparados a partir de cepas de referencia de los virus correspondientes.

4. Emparejado: esto significa que la sangre se extrae dos veces con un intervalo de tiempo determinado. Al aumentar el título de anticuerpos, se determina que se ha producido una infección. Si el título de anticuerpos no cambia, significa que estos anticuerpos han estado en el cuerpo durante mucho tiempo y no hay ninguna infección reciente.

El mayor valor diagnóstico es el estudio de sueros pareados extraídos de animales al inicio y al final de la enfermedad (con un intervalo de 14 a 21 días). El suero se recoge en tubos esterilizados y se almacena para realizar pruebas.

Descripción

El kit para el diagnóstico de la enfermedad por parvovirus porcino está destinado a la detección del antígeno de parvovirus en una suspensión de órganos internos de fetos abortados en la reacción de hemaglutinación (HIA) y anticuerpos específicos en el suero sanguíneo de los cerdos, así como de los lechones recién nacidos (antes de recibir calostro). ) en la reacción de inhibición de la hemaglutinación (HIA). La reacción se lleva a cabo mediante el micrométodo en pocillos de placas de poliestireno. placas de poliestireno de 96 pocillos para reacciones inmunológicas; antígeno inactivado específico con actividad hemaglutinante de al menos 1:128; suero específico con actividad en RTGA no inferior a 1:256; suero normal (control negativo).

Tiempo de análisis:

RGA - 2,5-3,5 horas, RTGA - 3,5-4,5 horas (sin tener en cuenta el tiempo de preparación de los materiales para el estudio).

Principio del método:

La reacción de hemaglutinación (HRA) se basa en el pegado de glóbulos rojos suspendidos en un líquido bajo la influencia de las propiedades hemaglutinantes del virus y la formación de un sedimento suelto en forma de paraguas. La esencia de RTHA es neutralizar las propiedades hemaglutinantes del virus con anticuerpos específicos contenidos en el suero sanguíneo, por lo que los glóbulos rojos no se pegan entre sí y se depositan en el fondo, formando un sedimento denso en forma de botón.

Condiciones de almacenamiento

El kit se almacena en un lugar seco, protegido de la luz, a una temperatura de 2 a 8°C. Una vez disueltos, los componentes del kit se pueden almacenar congelados durante 1 mes; no se permite volver a congelarlos.

Fecha de caducidad

Los glóbulos rojos (o partículas de látex) con antígenos adsorbidos interactúan con los anticuerpos correspondientes en el suero sanguíneo, lo que hace que los glóbulos rojos se peguen y caigan al fondo del tubo de ensayo o en forma de célula festoneada. sedimento. En una reacción negativa, los glóbulos rojos se depositan en forma de botón. Reacción de aglutinación Los resultados de la reacción se tienen en cuenta mediante microscopio y visualmente y se determinan en cruces según el siguiente esquema: (++++) - limpieza completa del líquido y formación de un aglutinado en el fondo del pozo en forma de “paraguas” invertido, cuando se agita, el “paraguas” se rompe en escamas; (+++) - aclaramiento incompleto del líquido y un “paraguas” bien definido; (++) - aclaramiento notable del líquido, el "paraguas" se expresa moderadamente; (+) - aclaramiento apenas perceptible del líquido, el "paraguas" se expresa débilmente; (-) - resultado negativo, el líquido no se ha aclarado, hay un sedimento en forma de botón en el fondo del pozo, con agitación suave se forma una suspensión uniforme. Como título de anticuerpos se tomó la última dilución del suero problema en la que se produjo aglutinación de al menos dos cruces (++).

Reacción de inhibición de la hemaglutinación.

Reacción de hemaglutinación

Reacción de aglutinación

La reacción de aglutinación (RA) es el pegado y precipitación de microbios u otras células bajo la influencia de anticuerpos en presencia de un electrolito (solución isotónica de cloruro de sodio). El precipitado resultante se llama aglutinar.

Para la reacción necesitas:

1. Anticuerpos (aglutininas): se encuentran en el suero del paciente o en el suero inmunológico.

2. Antígeno: una suspensión de microorganismos, glóbulos rojos u otras células vivos o muertos.

3. Solución isotónica.

La reacción de aglutinación para el serodiagnóstico se utiliza ampliamente en la fiebre tifoidea, la fiebre paratifoidea (reacción de Vidal), la brucelosis (reacción de Wright), etc. El anticuerpo se el suero del paciente y el antígeno es un microbio conocido.

Al identificar microbios u otras células, se utiliza su suspensión como antígeno y un suero inmunológico conocido como anticuerpo. Esta reacción es muy utilizada en el diagnóstico de infecciones intestinales, tos ferina, etc.

En la práctica de laboratorio se utilizan dos reacciones de hemaglutinación (HRA) que se diferencian en su mecanismo de acción.

Primera RGA se refiere a serológico. En esta reacción, los glóbulos rojos se aglutinan al interactuar con los anticuerpos correspondientes (hemaglutininas). La reacción se usa ampliamente para determinar los grupos sanguíneos.

Segunda RGA No es serológico. En él, la unión de los glóbulos rojos no es causada por anticuerpos, sino por sustancias especiales formadas por virus. Por ejemplo, el virus de la influenza aglutina los glóbulos rojos de pollos y cobayas, y el virus de la polio aglutina los glóbulos rojos de las ovejas. Esta reacción permite juzgar la presencia de un virus en particular en el material en estudio.

Se trata de una reacción serológica en la que anticuerpos antivirales específicos, al interactuar con el virus (antígeno), lo neutralizan y lo privan de la capacidad de aglutinar glóbulos rojos, es decir, inhibir la reacción de hemaglutinación. La alta especificidad de la reacción de inhibición de la hemaglutinación (HAI) permite utilizarla para determinar el tipo e incluso el tipo de virus detectados durante la prueba HRA.

La reacción de hemaglutinación indirecta (pasiva) (IRHA) se basa en el hecho de que los glóbulos rojos, si se adsorbe un antígeno soluble en su superficie, adquieren la capacidad de aglutinarse al interactuar con anticuerpos contra el antígeno adsorbido. El diagrama RNGA se muestra en la Fig. RNGA se usa ampliamente en el diagnóstico de varias infecciones.

Arroz. Esquema de la reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA). A - obtención de un diagnóstico de eritrocitos; B - RNGA: 1-eritrocito: 2 - antígeno en estudio; 3 - diagnóstico de eritrocitos; 4 - anticuerpo contra el antígeno en estudio: 5 - aglutinar.

Con RNGA, se puede determinar un antígeno desconocido si los anticuerpos conocidos se adsorben en los eritrocitos.